[发明专利]促进枯草芽孢杆菌发酵生产N-乙酰神经氨酸的方法

说明书

一种促进枯草芽孢杆菌发酵生产N‑乙酰神经氨酸的方法，属于枯草芽孢杆菌发酵生产N‑乙酰神经氨酸领域。本发明提供的促进枯草芽孢杆菌发酵生产N‑乙酰神经氨酸的方法，是将能够发酵生产N‑乙酰神经氨酸的枯草芽孢杆菌接种至发酵培养基中进行发酵培养，在发酵培养过程中加入裂殖壶菌的菌粉。该促进枯草芽孢杆菌发酵生产N‑乙酰神经氨酸的方法能够有效的提高N‑乙酰神经氨酸的产率。

技术领域

本发明涉及一种枯草芽孢杆菌发酵生产N-乙酰神经氨酸技术领域，且特别涉及一种促进枯草芽孢杆菌发酵生产N-乙酰神经氨酸的方法。

背景技术

N-乙酰神经氨酸(N-acetylneuraminic acid)Neu5Ac是细胞信息传递的第一接触位点，其分子结构具有多样性，因此Neu5Ac参与细胞识别、信号转导、肿瘤发生、受精等多个生理过程，Neu5Ac还能调节IgG的抗炎活性，增强婴儿免疫力，影响神经细胞的完整性、渗透性及活性，促进婴儿大脑的发育，所以N-乙酰神经氨酸的生产引起了较多的关注和研究。

N-乙酰神经氨酸具有很大的经济价值，其生产方法有很多，如从天然原料中提取、化学合成等，但这些方法均均存在成本高、工艺苛刻、收率低等问题。微生物发酵法也是制备N-乙酰神经氨酸研究较多的方法，其具有成本低、操作简单等优点，目前主要是利用大肠杆菌工程菌发酵得到聚唾液酸和N-乙酰神经氨酸，芽孢杆菌属中的一些菌株，如枯草芽孢杆菌，是GRAS认证的安全菌株，由于不具有致病性、不易受噬菌体污染等优势，也是一种重要的宿主菌，被广泛应用于工业生产。因此，利用构建的芽孢杆菌工程菌生产食品、医药品等添加原料与材料，如N-乙酰神经氨酸，具有很高的安全性和很大的应用前景，但是枯草芽孢杆菌等芽孢杆菌类基因工程菌发酵生产N-乙酰神经氨酸发酵产量较低，难以满足使用的需求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种促进枯草芽孢杆菌发酵生产N-乙酰神经氨酸的方法，其能够有效的提高N-乙酰神经氨酸的产率。

本发明解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。

一种促进枯草芽孢杆菌发酵生产N-乙酰神经氨酸的方法，将能够发酵生产N-乙酰神经氨酸的枯草芽孢杆菌接种至发酵培养基中进行发酵培养，在发酵培养过程中加入裂殖壶菌的菌粉。

进一步地，在本发明较佳实施例中，上述发酵培养基包括以下成分：甘油10-30g/L；胰蛋白胨2-6g/L；磷酸二氢钾4-8g/L；硫酸铵2-4g/L；七水硫酸镁0.5-2g/L；IPTG1-3mmol/L。

进一步地，在本发明较佳实施例中，上述在发酵培养的第0-72h之间加入裂殖壶菌的菌粉。

进一步地，在本发明较佳实施例中，上述裂殖壶菌的菌粉的添加量为每1L发酵培养基中加入1-4g。

进一步地，在本发明较佳实施例中，上述在发酵培养的第20-24h之间加入裂殖壶菌的菌粉，添加量为2-2.5g/L发酵培养基。

进一步地，在本发明较佳实施例中，上述裂殖壶菌的菌粉是将裂殖壶菌依次使用液体种子培养基和液体发酵培养基培养得到裂殖壶菌菌体，将裂殖壶菌菌体离心、干燥得到。

进一步地，在本发明较佳实施例中，上述液体种子培养基包含以下成分：葡萄糖30-50g/L、谷氨酸钠20-40g/L、酵母浸膏4-8g/L、氯化钠15-25g/L、磷酸二氢钾4-8g/L、硫酸镁6-10g/L。

进一步地，在本发明较佳实施例中，上述液体发酵培养基包含以下成分：葡萄糖50-70g/L、谷氨酸钠20-40g/L、酵母浸膏4-8g/L、氯化钠15-25g/L、磷酸二氢钾4-8g/L、硫酸镁6-10g/L。

进一步地，在本发明较佳实施例中，上述裂殖壶菌的保藏编号为CCTCC NO：M2012494。