[发明专利]一种测定参芪扶正注射液中核苷类含量的方法

说明书

本发明提供一种测定参芪扶正注射液中核苷类含量的方法，具体步骤包括：A、调节高效液相色谱仪检测条件：色谱柱：PurospherR STAR C18或Phenomenex Luna C18，流动相：磷酸二氢钾的缓冲水溶液(A)一乙腈(B)；B、样品配制：C、进样、等待供试品及对照品结果，按外标法以峰面积计算，分别计算各供试品各核苷类组分的含量。经过长期反复验证后，本方法准确度、精密度、专属性高，色谱条件耐用性良好。

技术领域

本发明属中药的含量测定方法领域，特别涉及参芪扶正注射液的核苷类物质含量的测定方法。

背景技术

参芪扶正注射液是丽珠集团利民制药厂研制开发成功的国家二类中药新药参芪扶正注射液，该药为国内首创的纯中药澄明大输液，1999年11月获国家药品监督管理局正式生产批文。参芪扶正注射是由传统补气药党参、黄芪组成的复方制剂，具有益气扶正之功效，用于肺脾气虚引起的神疲乏力，少气懒言，自汗眩晕；肺癌、胃癌见上述症候者的辅助治疗。

建立数字化中药技术是中药领域一项重大技术突破。参芪扶正注射液成分复杂，非常有必要利用现代先进的分析仪器，明确其中各种物质的含量。CN200710136382.0中报道了有关参芪扶正注射液的质量控制方法，按照该专利公开中记载的方法，建立起了参芪扶正注射液的HPLC指纹图谱，该专利可检测参芪扶正注射液中的多种物质。ZL201210436493.4公开的检测方法中显示，参芪扶正注射液其指纹图谱中仅特征峰就有18个之多；ZL201310008395.5进一步，参芪扶正注射液鉴别出来的成分有毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷，异微凸剑叶莎醇-7，2′-二-O-葡萄糖苷、鹰嘴豆芽素-7-葡萄糖苷、9，10-二甲氧基紫檀烷-3-O-木糖葡萄糖苷、黄芪甲苷、5-羟甲基糠醛等。

在当前技术背景中，测定参芪扶正注射液中核苷含量的必要性和意义：参芪扶正注射液是由等比例党参、黄芪药材经水提、醇沉等多道工序精制得到参芪提取物，再以其为原料进行配制、过滤、灭菌等复杂工序而制备的澄清中药大输液。尿苷、腺嘌呤、鸟苷及腺苷是党参和黄芪药材共有的物质基础，且均易溶于水，因此核苷类成分也是参芪扶正注射液的重要物质基础。由于核苷类成分是生物细胞维持生命的重要物质，具有调节免疫功能、调节血糖、促进肠道修复、降低血压、抗心律市场、抗缺血性损伤等多种生物活性，因此，核苷类含量水平的高低可能会影响参芪扶正注射液的疗效和质量，建立参芪扶正注射液中核苷类的定量分析方法可在一定程度上反映产品的质量。

发明内容

本发明建立一种利用色谱柱测定参苠扶正注射液中核苷类含量的方法。经过长期反复验证后，本方法准确度、精密度、专属性高，色谱条件耐用性良好。

本方法具体步骤如下：

1、调节高效液相色谱仪检测条件

色谱柱：PurospherR STAR C18(4.6mm×250mm，5μm)

流动相：磷酸二氢钾的缓冲水溶液(A)-乙腈(B)

流动相梯度见下表1：

表1梯度表

2、样品配制

稀释剂：流动相

对照品溶液：精密称取尿苷、腺嘌呤、鸟苷及腺苷适量于量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(浓度分别为约10mg/ml，5mg/ml，5mg/ml，5mg/ml)。

供试品溶液：取本品直接过滤即得。

3、进样、等待供试品及对照品结果，按外标法以峰面积计算，分别计算各供试品各核苷类组分的含量。

计算公式如下：各组分含量＝(供试品峰面积×对照品称样量×对照品含量)/(对照品峰面积×稀释倍数)