[发明专利]甘蓝BoMS1基因及其在创制不育材料中的应用

权利要求书

1.下调或突变甘蓝BoMS1基因的表达在创制雄性不育植株系中的应用，其特征在于，所述甘蓝BoMS1基因的编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，甘蓝BoMS1基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2或SEQ ID No.3所示；所述应用为将插入有iBoMS1基因表达盒的植物表达载体用农杆菌转染甘蓝下胚轴转化法转入甘蓝，获得转基因雄性不育株系，所述iBoMS1的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；iBoMS1的上游插入有启动子PBoMS1，PBoMS1的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示。

2.下调或突变甘蓝BoMS1基因的表达在创制与保持系花期杂交亲和的雄性不育系中的应用，其特征在于，所述甘蓝BoMS1基因的编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，甘蓝BoMS1基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2或SEQ ID No.3所示；所述应用为将插入有iBoMS1基因表达盒的植物表达载体用农杆菌转染甘蓝下胚轴转化法转入甘蓝，获得转基因雄性不育株系，所述iBoMS1的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；iBoMS1的上游插入有启动子PBoMS1，PBoMS1的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示；所述植物表达载体还插入有iSRK3基因表达盒，所述iSRK3基因表达盒中含有iSRK3，iSRK3的核苷酸序列如SEQ ID No.8所示。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述iSRK3的上游插入有SLG13启动子，SLG13启动子的核苷酸序列如SEQ ID No.9所示。

4.如权利要求2或3所述的应用，其特征在于，将权利要求2或3所述的植物表达载体用农杆菌转染甘蓝下胚轴转化法转入甘蓝，获得与保持系花期杂交亲和的转基因雄性不育株系。

5.下调或突变甘蓝BoMS1基因的表达在创制雄性不育植株系中的应用，其特征在于，所述甘蓝BoMS1基因的编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，甘蓝BoMS1基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2或SEQ ID No.3所示；按照CRISPR/Cas9基因编辑系统目标位点的序列特征要求，分别从BoMS1基因外显子和SRK3基因外显子各选择4个长度为20bp的目标位点，目标位点下游含PAM序列-NGG；针对BoMS1基因外显子的含PAM序列-NGG的目标位点的核苷酸序列为5'-GCCTTTCTAAAACTAGAAGGAGG-3'、5'- GAGTAGCAAAAGGAGAGCCGTGG-3'、5'-CCATCGAAGCCTCTCTTAACCTC-3'和5'- AAGTTGGTCCTTTCAGCTCGAGG-3'；针对SRK3基因外显子的含PAM序列-NGG的目标位点的核苷酸序列为5'-GTGGCAGAGCTTCTCGCCAACGG-3'、5'-AACCCTATATCCAACTCCACTGG-3'、5'- GTGGGATCTTTAGAGTGCATCGG-3'和5'-GGCAATAATCTTGTCCTCCTTGG-3'；将所述目标位点分别组装到tRNA-sgRNA多位点表达盒的BbsI, BsaI, BsmBI和BfuAI 位点得到靶向BoMS1基因和SRK3基因的tRNA-sgRNA多位点表达盒装，最后将靶向BoMS1基因和SRK3基因的tRNA-sgRNA多位点表达盒装载到表达Cas9蛋白的表达载体中，获得可同时敲除BoMS1基因和SRK基因的植物表达载体，植物表达载体转化甘蓝自交不亲和系选育与保持系花期杂交亲和的非转基因雄性不育系。