[发明专利]一种结缕草的诱导愈伤组织的方法

说明书

本发明公开了一种结缕草的诱导愈伤组织的方法。方法包括：将结缕草的茎尖外植体接种于诱导培养基中进行培养；通过暗培养的方式，其中所述的诱导培养基配方为：MS+2,4‑D 2.0‑3.0mg/L+6‑BA0.05‑0.1mg/L。本发明的外植体选用数量大且易采集的茎尖，通过适宜的生长调节剂及光照条件使愈伤组织诱导率达90％以上，远高于现有技术(愈伤组织诱导率仅为56.8％)。

技术领域

本发明涉及组织培养，尤其涉及一种结缕草的诱导愈伤组织的方法。

背景技术

结缕草属植物是禾本科画眉草亚科多年生草本植物，具备适应性强、植株密度大、覆盖地面能力强、耐旱、耐修剪践踏、再生恢复能力强，常用作于草坪草、生态治理、保持水土、净化水源，是优良的生态环保型草坪草，应用逐渐广泛。目前使用主要存在两类问题：1、生长速度较慢，常规的有性及无性繁殖方法无法满足日益增长的大量需求。2、现有可用品种较单一，优良新品种急待选育，以适应更广泛的区域。

通过组织培养手段可进行人工扩繁增大其繁殖再生系数，此外，体细胞胚(体胚)变异具有特殊的科学价值，获得优新种质的年限短，该技术尤其为获得纯系年限长、有性杂交困难、无性繁殖为主的结缕草属植物种质资源创新提供了新的途径。组织培养植株再生过程中愈伤组织诱导是关键环节，体胚诱变种质创新中单个体细胞的形成也依赖于愈伤组织的形成。

目前，虽然已有相关研究开展了结缕草属植物愈伤组织形成的研究，但已有方法如外植体采集不当(如利用茎基进行诱导，在叶片剥离过程中茎基极易受损)或数量少(如利用匍匐茎进行诱导，匍匐茎生长数量有限且采集困难)愈伤组织诱导基数低。

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在的问题，本发明提供提升诱导率的结缕草的诱导愈伤组织的方法。

技术方案：

一种结缕草的诱导愈伤组织的方法，包括：将结缕草的茎尖外植体接种于诱导培养基中进行培养；其中所述的诱导培养基配方为：MS+2,4-D 2.0-3.0mg/L+6-BA0.05-0.1mg/L。

优选，所述的诱导培养基配方为：MS+2,4-D 2.5-3.0mg/L+6-BA0.05-0.1mg/L。

所述的诱导培养基的pH为5.8～6.0。

所述外植体的获得方法包括：结缕草生长季5-9月，选择长势良好，无病害的结缕草植株，将直立茎顶端2-4cm茎段采下，将所带叶片由上至下剥离。

接种前，将外植体进行消毒处理。

所述消毒处理的方法包括：将外植体先用升汞浸泡30s，再用无菌水消毒3-4次，然后再用酒精浸泡5min，最后再用无菌水冲洗3-4次。消毒后将外植体放在无菌纸上降温，待温度适宜35-40℃之后剪成适当的长度2-3cm开始接种。

所述培养为暗培养。

所述暗培养的条件，温度:白天(25±1)℃，夜晚(18±1)℃；湿度：65％～75％。所述白天的时间为10～12h，所述夜晚的时间为10～12h。

所述结缕草为沟叶结缕草、细叶结缕草、中华结缕草或青岛结缕草。

有益效果：

本发明的外植体选用数量大且易采集的茎尖，通过适宜的生长调节剂及光照条件使愈伤组织诱导率达90％以上，远高于现有技术(愈伤组织诱导率仅为56.8％)

附图说明

图1为实施例3暗培养条件下培养的结果；

图2为实施例3光照条件下培养的结果。

具体实施方式