[发明专利]一种植物环状RNA表达框架及其应用有效
| 申请号： | 201811132313.7 | 申请日： | 2018-09-27 |
| 公开（公告）号： | CN109355290B | 公开（公告）日： | 2021-12-14 |
| 发明（设计）人： | 卢艳丽;唐鑫;徐洁;王琦;周巧;毛燕;刘天红;冯宣军;刘亚西;兰海;胡尔良;李梦璐 | 申请（专利权）人： | 四川农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/82;C12N15/66 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君;王璐 |
| 地址： | 611130 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 植物 环状 rna 表达 框架 及其 应用 | ||
1.一种植物环状RNA表达框架，其特征在于，由上游框架序列、待表达目的基因序列和下游框架序列组成；
所述上游框架序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；
所述下游框架序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.一种植物环状RNA表达载体，其特征在于，所述植物环状RNA表达载体含有权利要求1所述的植物环状RNA表达框架。
3.根据权利要求2所述的植物环状RNA表达载体，其特征在于，所述植物环状RNA表达载体的制备方法为：将所述植物环状RNA表达框架通过同源重组的方法构建到植物表达载体中。
4.根据权利要求3所述的植物环状RNA表达载体，其特征在于，在进行同源重组前，在所述植物环状RNA表达框架的两端添加植物表达载体同源臂。
5.根据权利要求3所述的植物环状RNA表达载体，其特征在于，所述植物表达载体为pCAMBIA1302、pCAMBIA3301或pCAMBIA2300。
6.根据权利要求2~5任一项所述的植物环状RNA表达载体，其特征在于，所述植物环状RNA表达载体的构建方法包括：
（1）以玉米基因组为模板，利用以下两组引物进行分段PCR扩增，分别得到所述上游框架序列和所述下游框架序列；
第一组引物：
F：5’-GTGCTCGCCTTACCGCCT-3’；
R：5’-CTGCAAGAAGTAATCTAAAATCA-3’；
第二组引物：
F：5’-GTATGTTACCAAATTTAT-3’；
R：5’-CTGCCAGAAATATACA-3’；
（2）再利用融合PCR的方法将待表达目的基因构建于所述上游框架序列和所述下游框架序列之间，得到所述植物环状RNA表达框架；
（3）将所述植物环状RNA表达框架通过同源重组的方法构建到植物表达载体中。
7.根据权利要求2~5任一项所述的植物环状RNA表达载体，其特征在于，当待表达目的基因为玉米
（1）以玉米基因组为模板，利用以下引物进行PCR扩增，得到植物环状RNA表达框架；
引物F：5’-GTGCTCGCCTTACCGC-3’；
引物R：5’-CTGCCAGAAATATACAT-3’；
（2）将所述植物环状RNA表达框架通过同源重组的方法构建到植物表达载体中。
8.权利要求1所述的植物环状RNA表达框架或权利要求2~7任一项所述的植物环状RNA表达载体在植物中表达特定目的基因环状RNA方面的应用。
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