[发明专利]一株肺炎克雷伯氏菌新菌株及其分离方法和应用有效

专利信息
申请号: 201811132568.3 申请日: 2018-09-27
公开(公告)号: CN109055282B 公开(公告)日: 2022-02-22
发明(设计)人: 张安龙;赵呈馨;王雪青;王欣奇;罗清;房玉婷;王哲毅;陈朵 申请(专利权)人: 陕西科技大学
主分类号: C12N1/20 分类号: C12N1/20;C12N1/02;C02F3/34;C12R1/22
代理公司: 西安通大专利代理有限责任公司 61200 代理人: 徐文权
地址: 710021 *** 国省代码: 陕西;61
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摘要:
搜索关键词: 肺炎 克雷伯氏菌新 菌株 及其 分离 方法 应用
【说明书】:

发明公开了一株肺炎克雷伯氏菌新菌株及其分离方法和应用,所述新菌株从造纸污水处理厂曝气池活性污泥中分离、筛选得到,保藏在中国普通微生物菌种保藏管理中心,保藏名称为,ZS‑01,保藏号是16041,保藏日期为2018年6月30日。所述菌株特性及性能:(1)特性:在苯酚MedA固体培养基上形成的菌落为较短粗的杆菌,大小0.5~0.8×1~2μm,单独或成双排列,形成淡黄色菌落,质地均匀且不透明;在MPYE固体培养基上形成较大的灰白色粘性菌落;无鞭毛,有荚膜,菌株属肠杆菌科,为革兰氏染色阴性的粗短杆菌。(2)性能:具有一定的苯酚降解能力;对苯酚具有较高的耐受性。其优点是:能够降解较高浓度的苯酚,为有效处理较高浓度的含酚废水提供了新菌源。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域,涉及一株肺炎克雷伯氏菌新菌株及其分离方法和应用。

背景技术

苯酚存在于提炼厂、石化制造等各种工业废水中。苯酚也是煤气化和液化过程,凝析油流中主要的有机组分。制药厂,原木加工厂,造纸厂,制塑厂等的工业废水中也含有苯酚。未经处理的含苯酚工业废水不能排放到开放水域,否则会使饮用水和食品加工用水产生异味。环境保护署制定了一个排放标准:地表水中苯酚的含量低于十亿分之一。含酚工业废水污染面积广、危害作用大,对居民饮食、鱼类养殖及农作物灌溉都会带来严重危害。水体中苯酚浓度高于50ppb对水生生物是有毒害的,血液中4.7-130mg/100mL苯酚是致死的,苯酚会损害神经系统及主要器官包括脾、胰和肝,持久摄入10-240mg/L浓度的苯酚会引起嘴唇发炎酸痛、腹泻、黑色尿液及视力受损。

苯酚是一种具有特殊气味的无色针状晶体,有毒,苯酚分子由一个羟基直接连在苯环上构成。由于苯环的稳定性,这样的结构几乎不会转化为酮式结构。酚羟基的氧原子采用sp2杂化,提供一对孤电子与苯环的6个碳原子共同形成离域键。大π键加强了烯醇的酸性,羟基的推电子效应又加强了O-H键的极性,因此苯酚中羟基的氢可以电离出来。

目前对于苯酚的处理方法主要分为3大类,即化学方法、物理方法和生物方法,微生物法降解苯酚,该方法条件温和,特异性强,且不涉及二次污染等问题,是环境友好型处理方法。因此,微生物法降解苯酚这一思路吸引了国内外学者的广泛关注。

发明内容

本发明的目的在于提供一株肺炎克雷伯氏菌新菌株及其分离方法和应用。

为了达到上述目的,本发明采用以下技术方案予以实现:

本发明公开了一种肺炎克雷伯氏菌菌株,该肺炎克雷伯氏菌菌株命名为Klebsiella Pneumoniae sp,保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心,菌种保藏号为CGMCC No.16041,保藏日期为为2018年7月2日。

优选地,所述肺炎克雷伯氏菌菌株在苯酚MedA固体培养基上培养时,形成粗短的黄色杆菌菌落,大小为0.5~0.8×1~2μm,单独或成双排列,质地均匀且不透明。

优选地,所述肺炎克雷伯氏菌菌株在MPYE固体培养基上培养时,形成较大的灰白色粘性菌落;无鞭毛,有荚膜,为革兰氏染色阴性的粗短杆菌。

优选地,该肺炎克雷伯氏菌菌株在30℃~35℃,pH为7时生长状态良好。

本发明还公开了上述的肺炎克雷伯氏菌菌株的分离方法,包括以下步骤:

1)取样:取造纸污水处理厂曝气池活性污泥,注入灭菌且苯酚作为唯一碳源的培养液中,制成菌液;

2)富集:将步骤1)制得的菌种按10%的接种量接种到100mL MPYE培养液中,于35℃、200r/min的条件下摇床培养,培养期间观测溶液浑浊情况,取上清液制成富集菌液;

3)初筛:将步骤2)的富集菌液取15mL加入装有135mL的MedA培养基锥形瓶中,每组3个平行样,置于35℃恒温摇床中,200r/min培养,待溶液浑浊后逐级接入高浓度苯酚含量的MedA培养基中,进行菌种的逐级筛选驯化,初步筛选得到细菌;

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