[发明专利]一种用于测定多黏菌素类抗菌肽的毛细管电泳方法及其运行缓冲液

权利要求书

1.一种基于毛细管电泳的用于测定多黏菌素类抗菌肽的运行缓冲液，其特征在于，所述运行缓冲液为含羟丙基类环糊精、有机溶剂的三乙醇胺溶液或三乙胺溶液。

2.根据权利要求1所述的运行缓冲液，其特征在于，所述羟丙基类环糊精包括羟丙基-β-环糊精、羟丙基-α-环糊精、羟丙基-γ-环糊精和/或其硫酸化环糊精和/或磺酸化环糊精；所述有机溶剂包括异丙醇、乙腈和/或甲醇。

3.根据权利要求1所述的运行缓冲液，其特征在于，所述环糊精的浓度为5mmol/L-50mmol/L，所述有机溶剂的含量为1v％-10v％，所述三乙醇胺溶液或三乙胺溶液的浓度为80-160mmol/L；其中所述三乙醇胺溶液或三乙胺溶液的pH经酸溶液调整至2-4，所述酸溶液包括甲酸、磷酸、盐酸或硫酸。

4.根据权利要求2所述的运行缓冲液，其特征在于，所述环糊精为羟丙基-β-环糊精，其浓度为5mmol/L-50mmol/L；所述有机溶剂为异丙醇，其含量为1v％-10v％，所述运行缓冲液为含羟丙基-β-环糊精、异丙醇的三乙醇胺溶液，所述三乙醇胺溶液的浓度为80-160mmol/L。

5.一种测定多黏菌素类抗菌肽的毛细管电泳方法，其特征在于，包括如下步骤：将多黏菌素类抗菌肽样品在溶剂中溶解后，直接在权利要求1～4中任一项所述的运行缓冲液中通过毛细管电泳测定多黏菌素类抗菌肽。

6.根据权利要求5所述的毛细管电泳方法，其特征在于，所述溶剂选自水、乙腈、甲醇、异丙醇或其混合物或其缓冲液；所述多黏菌素类抗菌肽溶解后的终浓度为0.1mg/mL-20mg/mL。

7.根据权利要求5所述的毛细管电泳方法，其特征在于，所述多黏菌素类抗菌肽包括由多黏类芽孢杆菌或其他相关属种发酵产生及化学合成的多黏菌素A、多黏菌素B、多黏菌素C、多黏菌素D、多黏菌素E、多黏菌素F、多黏菌素K、多黏菌素M、多黏菌素P、多黏菌素S、多黏菌素T。

8.根据权利要求7所述的的毛细管电泳方法，其特征在于，所述多黏菌素类抗菌肽的测定包括主要成分和有关物质的测定，其中，当所述多黏菌素类抗菌肽为多黏菌素B，其主要成分为多黏菌素B1、多黏菌素B2、多黏菌素B3及多黏菌素B1-I，有关物质包括多黏菌素B4、多黏菌素B5、多黏菌素B6、多黏菌素B2-I、多黏菌素B3-I、多黏菌素B丝氨酸取代物、多黏菌素B缬氨酸取代物、多黏菌素B双键化取代物中的至少一种；当所述多黏菌素类抗菌肽为多黏菌素E，其主要成分为多黏菌素E1、多黏菌素E2，有关物质包括多黏菌素E3、多黏菌素E4、多黏菌素E7、多黏菌素E1-I、多黏菌素E2-I、多黏菌素E丝氨酸取代物、多黏菌素E缬氨酸取代物、多黏菌素E双键化取代物中的至少一种。

9.根据权利要求5所述的毛细管电泳方法，其特征在于，所述多黏菌素类抗菌肽样品包括含多黏菌素类抗菌肽的原料药、注射剂、软膏剂、固体剂。

10.根据权利要求5所述的毛细管电泳方法，其特征在于，所述毛细管电泳方法中采用的分离毛细管包括非涂层熔融石英毛细管或涂层毛细管，所述涂层毛细管包括阳离子涂层毛细管、阴离子涂层毛细管、中性涂层毛细管；所述毛细管长度为30-100cm，内径为25μm-100μm。

11.根据权利要求5所述的毛细管电泳方法，其特征在于，所述毛细管电泳方法中，进样方式为压力进样：30mbar-50mbar，3-20s；分离电压采用10kV-30kV；检测波长范围为180-380nm；毛细管控制温度为20℃-40℃。

12.根据权利要求5所述的毛细管电泳方法，其特征在于，当所述运行缓冲液为含羟丙基-β-环糊精、异丙醇的三乙醇胺溶液时，毛细管出口缓冲液含有羟丙基-β-环糊精或不含有羟丙基-β-环糊精。