[发明专利]一种消除层析中洗脱肩峰的方法

说明书

本发明提供一种消除层析中洗脱肩峰的方法，是使用离子交换填料以结合洗脱的方式进行蛋白纯化，同时消除目的蛋白洗脱时UV检测出现的肩峰。其中，离子交换填料为Capto S ImpAct，该方法包括以下步骤：a)平衡：上样前用平衡缓冲液对离子交换填料进行平衡；b)上样：将蛋白样品加载至离子交换填料上，目的蛋白与离子交换填料结合；c)淋洗：用淋洗缓冲液淋洗离子交换填料；d)洗脱：用洗脱缓冲液将目的蛋白从填料上洗脱下来。本发明的方法通过利用差异化平衡缓冲液/淋洗缓冲液和洗脱缓冲液的pH值的方法达到了消除纯化蛋白过程中洗脱肩峰的效果。

技术领域

本发明涉及生物制药领域，特别是涉及层析步骤中一种消除层析中洗脱肩峰的方法一种消除层析中洗脱肩峰的方法。

背景技术

离子交换层析，作为生物制药下游工艺中的精细纯化步骤，能够高效去除杂质，提高生物药蛋白质量。在结合洗脱模式的离子交换层析中，填料上结合的目的蛋白在盐浓度梯度或pH梯度洗脱过程中以单峰形式洗脱，但部分蛋白也会出现双峰形式的洗脱特征。在大规模生产中洗脱出现肩峰会影响样品的质量和生产操作复杂性。通过特殊地改变离子交换层析条件消除肩峰现象，有利于工艺的改进和样品质量的控制。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于，提供一种消除层析中洗脱肩峰的方法，能够消除离子交换层析中的目的蛋白洗脱出现肩峰的问题，提高生产的可控性和工艺文稳健性。

为解决上述技术问题，本发明的一种消除层析中洗脱肩峰的方法，是使用离子交换填料以结合洗脱的方式进行蛋白纯化，同时消除目的蛋白洗脱时UV检测出现的肩峰。

具体的，所述离子交换填料为Capto S ImpAct。

具体的，所述方法包括以下步骤：

a)平衡：上样前用平衡缓冲液对离子交换填料进行平衡；

b)上样：将蛋白样品加载至离子交换填料上，目的蛋白与离子交换填料结合；

c)淋洗：用淋洗缓冲液淋洗离子交换填料；

d)洗脱：用洗脱缓冲液将目的蛋白从填料上洗脱下来。

具体的，所述方法还包括步骤：

e)结果评价：评估洗脱样品质量和层析图谱的特征。

具体的，所述平衡缓冲液与所述淋洗缓冲液的pH值相同，且低于所述洗脱缓冲液的pH值。

具体的，所述平衡缓冲液、淋洗缓冲液为50mM NaAc-HAc(pH 5.0)。

具体的，所述平衡缓冲液的体积为2-5个柱体积；

具体的，所述淋洗缓冲液的体积为3-5个柱体积。

具体的，所述洗脱缓冲溶液为50mM NaAc-HAc，70mM NaCl(pH 5.5)。

具体的，所述蛋白样品的pH为5.5，电导小于5mS/cm。

具体的，所述方法中，b)上样和c)淋洗的保留时间相同并大于3分钟。

本发明的方法是利用差异化平衡缓冲液/淋洗缓冲液和洗脱缓冲液的pH值的方法来消除纯化蛋白过程中洗脱肩峰的现象。研究发现，在目的蛋白的离子交换层析中，将平衡缓冲液/淋洗缓冲液的pH值调至低于洗脱缓冲液的pH值，可以消除出现目的蛋白洗脱时UV检测出现肩峰的现象。

附图说明

图1为原有离子交换层析工艺图谱(结合洗脱模式)。

图2为本发明的离子交换层析工艺图谱(结合洗脱模式)。

具体实施方式