[发明专利]NK细胞无动物源培养基

说明书

本发明提供一种NK细胞无动物源培养基，该NK细胞无动物源培养基为化学成分限定的无动物源培养基，克服了市售无血清培养基导致的细胞活性差、贴壁性差以及分泌外源蛋白的能力差等缺点。试验证明，采用本发明所述培养基，能保证NK细胞活性都大于30%，细胞数量达到1×10¹⁰。采用本发明所述培养基可以使产品更易于纯化，提高回收率，适合其高密度生长或高水平目的产物表达。

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别是涉及一种NK细胞无动物源培养基。

背景技术

自然杀伤细胞(natural killer cell，NK)是一群不同于T、B淋巴细胞的大颗粒淋巴细胞，它来源于骨髓肝细胞，主要分布于外周血、肝脏和脾脏，时抗肿瘤的第一道防线。无需抗原预先致敏即可直接识别和杀伤肿瘤细胞，能发挥非特异性杀伤靶细胞的作用，尤其是对多种肿瘤细胞有快速杀伤和溶解的作用，对肺癌、肝癌、卵巢癌、食道癌、结肠癌、胃癌、宫颈癌、骨癌等均有效果，以NK细胞为中心的巨噬细胞，24小时加以监视，一旦发现癌细胞，就陆续加以清除。。特别是对淋巴瘤和白血病细胞作用更为明显，因此，在机体免疫监视和早期抗感染免疫过程中起重要作用，是抗瘤免疫的第一线细胞，能迅速溶解某些肿瘤细胞。

临床试验显示NK细胞过继免疫治疗恶性肿瘤具有良好的应用前景。体外实验表明，细胞因子诱导的NK细胞是一种高细胞毒活性的免疫效应细胞。由于NK细胞在人体内的含量极少，NK疗法是采用特殊的培养方法，把癌患者本身的NK细胞在体外培养增殖，使细胞数目扩大数千倍且细胞毒活性极大增强，再回输患者的体内，是一种简单有效、安全又积极的最新强力治癌疗法。

但是，现有的NK细胞培养基由于含有血清或其他动物源成分，很难与NK细胞分离，进入人体之后会存在会产生毒副作用。无动物源培养基因其成分相对清楚、不存在动物源性病原微生物污染、批次间重复性好、便于细胞表达产品的分离纯化等优点，得到了普遍的应用。然而，商业化的NK细胞培养基其配方一直是秘而不宣的核心商业秘密，价格昂贵且应用范围有限。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种NK细胞无动物源培养基，用于解决现有技术中存在的诸多问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种NK细胞无动物源培养基，各原料物质的浓度为：

L-精氨酸120-250mg/L；

L-门冬氨酸200-300 mg/L；

L-胱氨酸二盐酸盐50-110 mg/L；

L-苯丙氨酸16-35 mg/L；

L-脯氨酸82-96 mg/L；

L-苏氨酸105-133 mg/L；

L-酪氨酸23-45 mg/L；

丁二酸45-58 mg/L；

丙酮酸钠85-92 mg/L；

无水磷酸二氢钠30-50 mg/L；

氯化钾263-322 mg/L；

氯化钠132-155 mg/L；

氯化镁55-63 mg/L；

无水氯化钙82-88 mg/L；

葡萄糖2000-3200 mg/L；

还原谷胱甘肽12-15 mg/L；

D-泛酸钙2-8 mg/L；

酚红4-6 mg/L；

叶酸2-3.6 mg/L；