[发明专利]一种造纸废水微生物菌剂的制备方法

权利要求书

1.一种造纸废水微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、造纸废水微生物菌种的获得和活化：

采集长期受造纸废水污染的适量土样，加入纯净水，静置一段时间后，用半纤维素降解菌液体选择性培养基、纤维素降解菌液体选择性培养基和木质素降解菌液体选择性培养基分别培养，培养得到的菌悬液递度稀释后用涂布法转接到对应的固体分离培养基上进行活化；

S2、分离和扩大培养各种微生物菌种：

将经步骤S1活化后的各个固体培养基上的单菌落进行分离，并将单菌落分别进行液体培养基扩大培养，使菌体含量达到1.0×10⁸～1.0×10⁹个/mL；

S3、造纸废水微生物菌种的降解验证：

将经步骤S2扩大培养后的各种微生物菌种做造纸废水的COD降解实验，具有降解纤维素功能的菌、具有降解木质素功能的菌、具有降解半纤维素功能的菌分别可以是白腐菌、芽孢杆菌、假单胞细菌、木霉、光合细菌、酵母菌等微生物；

S4、离心分离、干燥得到各种微生物菌粉：

将步骤S3中对造纸废水的COD具有降解能力的各个微生物菌种的菌液经过离心分离，收集沉淀即为微生物菌体，干燥后得到各种微生物菌粉；

S5、制备微生物菌剂：

将步骤S4得到的各种微生物菌粉均按质量比1：1混合后，得到混合菌粉，再将所述混合菌粉与纤维素酶按质量比为10:1混合，从而制成微生物菌剂。

2.根据权利要求1所述的造纸废水微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述的半纤维素降解菌液体选择性培养基包括以下组分：半纤维素15g/L，(NH₄)·2SO₄ 0.5g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5g/L，K₂HPO₄ 2.0g/L，CaCl₂ 0.1g/L，NaCl1.0g/L，调节pH为7.5～8.0。

3.根据权利要求1所述的造纸废水微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述的纤维素降解菌液体选择性培养基包括以下组分：CMC-Na 15g/L，(NH₄)·2SO₄ 0.5g/L，MgSO₄·7H₂O0.5g/L，K₂HPO₄ 2.0g/L，CaCl₂ 0.1g/L，NaCl1.0g/L，调节pH为7.5～8.0。

4.根据权利要求1所述的造纸废水微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述的木质素降解菌液体选择性培养基包括以下组分：纯碱木质素15g/L，(NH₄)·2SO₄ 0.5g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5g/L，K₂HPO₄ 2.0g/L，CaCl₂ 0.1g/L，NaCl1.0g/L，调节pH为7.5～8.0。

5.根据权利要求1所述的造纸废水微生物菌剂的制备方法，其特征在于：各种微生物菌种的固体培养基为在其液体培养基中加入15g琼脂粉制成，液体培养基和固体培养基均要经过121℃灭菌30min。

6.根据权利要求1所述的造纸废水微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述纤维素酶的酶活力为1～10万U/g。

7.根据权利要求1所述的造纸废水微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述液体培养基扩大培养包括三角瓶一级扩大培养和发酵罐二级扩大培养。