[发明专利]分子量≦5 000Da的党参寡糖在制备清除DPPH自由基的抗氧化活性药物中的应用

说明书

本发明公开了分子量≦5000Da的党参寡糖在制备清除DPPH自由基的抗氧化活性药物中的应用，并细化了党参寡糖的制备方法。本发明的有益效果为：本发明提供的党参寡糖在制备清除DPPH自由基的抗氧化活性药物中的应用，验证发现党参寡糖具有可以与Vc相媲美的体外抗氧化活性，通过对党参寡糖的单糖组成研究发现党参寡糖主要是由葡萄糖、果糖组成，另外还有极少量的甘露糖、鼠李糖、阿拉伯糖等。党参寡糖是由分子量173～1384的糖类化合物组成的糖混合物。采用PLS法进一步研究党参寡糖的单糖组成与其DPPH自由基清除活性的关联发现，鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖对DPPH自由基清除活性呈正相关，木糖、甘露糖、半乳糖对DPPH自由基清除活性呈负相关。

技术领域

本发明涉及医药生物技术领域，具体涉及党参寡糖在制备清除DPPH自由基的抗氧化活性药物中的应用。

背景技术

党参为桔梗科植物党参Codonopsis pilosula(Franch.)Nannf.，素花党参Codonopsis pilosula Nannf.var.modesta(Nann.f)L.T.Shen或川党参Codonopsistangshen Oliv.的干燥根，具有“补中益气、健脾益肺”之功效。糖类化合物是党参中的重要化学成分，可分为单糖、多糖和低聚糖，但是对于党参糖类化合物的研究主要集中在多糖，多糖可抗氧化，抗肿瘤及提高免疫力。对于党参中寡糖类成分(分子量≦5 000Da)却鲜有报道。

前期研究发现17批不同产地的党参药材中粗寡糖含量为8.10～33.92g/100g；Sephadex G-25洗脱得率为(81.9～89.2)％，糖含量较高，说明党参寡糖类成分是党参中的重要组分；通过抗氧化活性实验发现党参各组分的DPPH自由基清除活性强弱依次为：寡糖粗寡糖95％乙醇提取物醇提后水提取物粗多糖，说明党参寡糖类成分是党参中重要的活性组分。因此对党参寡糖类化合物的深入研究是十分必要的。

糖类化合物的单糖组成是研究其结构、性质及构效关系的一项基本内容，很多研究表明同种生物中的糖类化合物，由于其单糖组成不同，活性之间有着巨大的差异。张培等人研究发现党参多糖对HepG2的细胞毒活性与其单糖的种类存在相关性，含有半乳糖醛酸相对较高的党参多糖的细胞毒活性较强。邬澄飞等人研究发现低聚糖单糖构成种类增加，乳杆菌群增殖，短链脂肪酸含量提高，半乳糖比例的提高增强了短链脂肪酸中乙酸、丙酸含量。

因此，系统的研究糖类化合物的单糖组成与活性之间的相关性对于糖类化合物构效关系的研究具有重要意义。但目前尚未文献报道党参寡糖的单糖组成与其抗氧化之间的相关性。

发明内容

本发明的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供了党参寡糖在制备清除DPPH自由基的抗氧化活性药物中的应用。

为了实现上述目的，本发明提供的技术方案为：党参寡糖在制备清除DPPH自由基的抗氧化活性药物中的应用。

进一步的，上述的党参寡糖在制备体外抗氧化活性药物中的应用，所述党参寡糖的制备方法，包括以下步骤：

1)取10g党参粗粉，10倍量95％乙醇回流提取2次，1h/次，药渣晾干后，以10倍量水煎煮三次，45min/次，合并水煎液，50℃,60rpm减压浓缩至原体积的1/2～1/4，加95％乙醇至终浓度为80％，静置过夜，离心力10 600×g,离心15min()，上清液回收乙醇，即得到粗寡糖；

2)取粗寡糖溶于少量水中，上适宜规格的Sephadex G-25纯化，蒸馏水洗脱，洗脱流速为1mL/min～10mL/min，每管收集5mL-40mL；以苯酚硫酸法490nm进行检测，以试管号为横坐标，糖含量为纵坐标，作曲线，根据曲线合并洗脱液，50℃、60rpm减压浓缩近干状态，-80℃冰箱中4h，取出置冷冻干燥(24h)，得干燥的粉末，为党参寡糖成分(分子量≦5000Da)。

本发明的第二个目的是提供了一种清除DPPH自由基的抗氧化活性药物，由有效量做为活性成分的党参寡糖和助剂组成。