[发明专利]甘草次酸硬脂基酯中18α-和18β-差向异构体的高压液相定量检测方法及其应用

说明书

本发明公开了甘草次酸硬脂基酯中18α‑和18β‑差向异构体的高压液相定量检测方法及其应用，属于差向异构体检测技术领域。本发明是以苯基己基键合硅胶为固定相，通过以下色谱条件进行18α‑甘草次酸硬脂基酯和18β‑甘草次酸硬脂基酯的面积归一化法定量检测：流动相：乙腈:醋酸铵溶液=10‑25:75‑90；洗脱模式：等度洗脱；柱温：33‑38℃；检测波长：226‑280nm。本发明提供的方法可以将甘草次酸硬脂基酯中的18α‑和18β‑甘草酸异构体的高效分离，并进行面积归一化法定量检测，分离度满足要求，检测灵敏度高；且本发明可实现甘草次酸硬脂基酯样品中18α‑差向异构体的含量监测，可在甘草次酸硬脂基酯生产过程中的杂质监测和产品质量控制中广泛应用。

技术领域

本发明涉及差向异构体检测技术领域，涉及一种18α-和18β-甘草次酸硬脂基酯的定量检测方法，具体涉及甘草次酸硬脂基酯中18α-和18β-差向异构体的高压液相色谱定量检测方法及其应用。

背景技术

甘草次酸硬脂基酯又称甘草次酸十八酯、硬脂醇甘草亭酸酯，具有美白，抗氧化作用，常用于化妆品中。与甘草次酸相比，甘草次酸硬脂基酯由于分子中导入了亲油性的高级烷烃的分子结构，可与多种油脂及高级醇相溶，配伍性好，且对皮肤的杀菌、消炎作用比甘草次酸提高50%以上。甘草次酸硬脂基酯是由甘草次酸和十八烷醇发生酯化反应合成的，而甘草次酸是以甘草酸为反应起始物，经水解生成的。甘草酸由于其三萜皂苷母核中的18位手性碳原子（C-18）构型不同，存在着18α-和18β-差向异构体。自然界中甘草酸的存在形式主要为18β-甘草酸，同时也存在少量18α-甘草酸（小于5%）。另外，由于甘草次酸硬脂基酯的合成过程是在较高的温度及酸或碱的催化反应进行的，势必会有部分的18β-甘草酸或18β-甘草次酸发生异构化。因此，以甘草酸为反应起始物合成的甘草次酸硬脂基酯存在着18α-和18β-差向异构体。而甘草次酸硬脂基酯作为化妆品原料，对皮肤起杀菌、消炎作用的主要是18β-甘草次酸硬脂基酯。为了提高甘草次酸硬脂基酯中18β-甘草次酸硬脂基酯的含量，通常利用两种异构体在不同溶剂中溶解性不同的特点，经过多次重结晶除去甘草次酸硬脂基酯中的18α-甘草次酸硬脂基酯。

迄今为止，尚无甘草次酸硬脂基酯中18α-和18β-差向异构体的定量检测方法。

发明内容

本发明的目的是为了解决上述技术问题，提供一种简单、高效的甘草次酸硬脂基酯中18α-和18β-差向异构体的高压液相色谱定量检测方法。

本发明的另一目的是提供上述甘草次酸硬脂基酯中18α-和18β-差向异构体的高压液相色谱定量检测方法的应用。

一、18α-甘草次酸硬脂基酯的制备

文献记载，18α-甘草次酸的旋光度为 140～150°（光学异构体18α-甘草次酸制备方法研究，《新疆医科大学报》，2012,35（2）：134-137），本发明所采用的18α-甘草次酸标准品（阿拉丁购买）的旋光度为 146.1°；利用该标准品采用高压液相色谱法测得市售18α-甘草次酸的纯度为98%（面积归一法）。利用文献（JP 53063368）方法，以上述纯度≥98 %的市售18α-甘草次酸为原料，三乙胺为催化剂，加入溴代十八烷，正丁醇作为反应溶剂。常压下，加热回流，使得18α-甘草次酸与溴代十八烷发生较为完全的酯化反应，然后在乙醇中结晶、分离干燥后得到18α-甘草次酸硬脂基酯。该18α-甘草次酸硬脂基酯经旋光仪测得旋光度为111.1°，经质谱分析分子量为723.18，经元素分析含C元素79.63%（理论值为79.72%）、H元素11.26%（理论值为11.43%）。HR-ESI-MS结果：M/Z=723.6286[M+H]⁺（理论值723.6291），测试条件： Thermo Orbitrap Elite高分辨质谱仪，喷雾气：3arb，反吹气：1arb，毛细管电压：3.5Kv，离子源温度：275度。

二、甘草次酸硬脂基酯中18α-和18β-差向异构体的高压液相色谱检测