[发明专利]一组与结缔组织生长因子特异性结合的高亲和力核酸适配体及其应用

说明书

本发明涉及眼科学和生物技术领域，具体是一组与结缔组织生长因子(CTGF)特异性结合的高亲和力核酸适配体。本发明是基于SELEX技术筛选得到的一条特异性识别CTGF的高亲和力核酸适配体，并通过突变、截短和锁核酸替代等一系列的优化策略进一步改善核酸适配体的性能。所述的该组核酸适配体具有广阔的应用前景，可用于复杂体系中CTGF的捕获、体内外CTGF的检测以及在相关疾病中CTGF治疗药物的开发和靶向给药系统的构建等。本发明的核酸适配体面向实际应用具有巨大的潜力。

技术领域

本发明涉及眼科学和生物技术领域，具体地说，是一组与结缔组织生长因子(CTGF)特异性结合的高亲和力核酸适配体及其应用。

背景技术

结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)是近年来新发现的一种细胞因子，是高度保守的CCN家族成员之一。CTGF在人类多种组织器官中广泛表达，其在促进细胞增殖、刺激细胞迁移、介导细胞粘附、血管生成、软骨形成、骨骼发育、肿瘤的发生发展、组织修复和器官纤维化等生理和病理活动中发挥着非常重要的生物学功能。CTGF的表达水平与许多疾病相关，现已经成为多种疾病重要的诊断和治疗靶点。因此，迫切需要发展特异性识别CTGF的配体分子，从而为临床疾病中CTGF诊断试剂的制备、中和药物的开发和靶向给药系统的构建奠定基础，以及为基础研究中CTGF的捕获、富集和纯化提供有效的工具。

核酸适配体作为一种新型的生物识别分子，能够高特异识别并结合靶分子。它是通过指数富集性配体系统进化技术(Systematic Evolution of Ligands by ExponentialEnrichment,SELEX)从体外构建的随机核酸文库中筛选获得的ssDNA或者RNA分子。核酸适配体由于可化学合成、易于标记和修饰、识别靶标广泛、不受免疫原性和免疫条件的限制、高亲和力和强特异性等优点，可用于特定靶分子的分离、检测、活体内传递、中和药物开发等，在分析诊断和医药研究等领域中具有广阔的应用前景。

发明内容

本发明的目的在于提供一组与CTGF特异性结合的高亲和力核酸适配体。本发明的另一目的是提供该组核酸适配体在制备CTGF检测试剂、试剂盒或传感器中；在制备CTGF捕获、富集和纯化的制剂中；在制备CTGF相关临床疾病的诊断试剂、靶向传递系统、中和或阻断药物中等多方面的应用。

本发明通过SELEX技术筛选得到了与CTGF特异性结合的高亲和力核酸适配体，并通过突变、截短和锁核酸替代等一系列的优化策略进一步改善核酸适配体的亲和力、特异性、结构稳定性等性能，为复杂体系中CTGF的捕获和体内外CTGF检测试剂的制备及相关疾病中CTGF靶向给药系统构建和治疗药物的开发提供了一组特异性强、稳定性高、易于制备和修饰的高亲和力的生物识别分子。

本发明的主要技术方案是：1)通过磁珠SELEX技术筛选获得了一条与CTGF特异性结合的高亲和力核酸适配体；2)通过突变优化提高了该核酸适配体的亲和力；3)通过截短优化获得了该核酸适配体的核心序列，并进一步提高了其靶向亲和力；4)通过锁核酸替代显著改善了该核酸适配体的结构稳定性等。为CTGF相关的实验室技术的开发、临床诊断方法的发展和核酸药物的挖掘提供了有效的工具。

本发明的第一方面，提供了一组与CTGF特异性结合的高亲和力核酸适配体，其序列分别如SEQ ID No.1～SEQ ID No.11(表1)所示。

表1

本发明的第二方面，提供一组如上所述的核酸适配体在制备CTGF检测试剂、试剂盒或传感器中的应用。

进一步的，所述的试剂、试剂盒或传感器可用于快速检测体内外的CTGF。

本发明的第三方面，提供了一组如上所述的核酸适配体在制备CTGF捕获、富集和纯化制剂中的应用。