[发明专利]一种RFF1细胞

说明书

本发明公开提供了一种RFF1细胞，属于生物技术领域。本发明公开提供一种用于细胞免疫治疗的RFF1细胞，是一种攻防兼顾的超级T细胞，精准性高、杀伤率高。该细胞由以下方法制备得到：PBMC细胞负载致肿瘤突变的多肽，而后对负载多肽后的PBMC细胞进行多肽冲击；冲击后扩大培养，得到FF细胞；以致肿瘤突变的多肽作为抗原直接刺激该FF细胞以筛选精准多肽；敲除PBMC细胞上的免疫抑制性信号分子；以所述精准多肽负载PBMC并与敲除免疫抑制性信号分子的PBMC细胞混合后共培，在共培过程中，用精准多肽进行多次冲击，得到RFF1细胞。该细胞可用于细胞免疫治疗技术。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种用于细胞免疫治疗的RFF1细胞及其制备方法。

背景技术

肿瘤细胞免疫治疗是一种新兴的肿瘤治疗模式，它从病人体内采集免疫细胞，然后进行体外培养和扩增，再回输到病人体内，来激发以及增强机体的自身免疫功能以治疗肿瘤。肿瘤细胞免疫治疗是继手术、放疗和化疗之后的第四种肿瘤治疗方法。

正常或生物工程改造过的人体细胞移植或输入患者体内，新输入的细胞可以替代受损细胞、或者具有更强的免疫杀伤功能，从而达到治疗疾病的目的。

生物工程改造过的人体细胞用特殊方法在体外培养过程中加以改造，可有效杀除患者体内肿瘤细胞。如，中国专利申请CN201210194280.5提供了一种人细胞因子诱导的杀伤细胞。中国专利申请CN201510034781.0提供一种肿瘤细胞特异性多克隆T细胞。中国专利申请CN201510013987.5提供一种抗肿瘤T细胞及其制备方法。中国专利申请CN201711060030.1提供一种治疗艾滋病合并淋巴瘤的CAR-T细胞及其制备方法和应用。CN201610824893.0提供一种抗体调控的双抗原特异性T细胞及其制备方法和应用。

发明内容

本发明旨在提供一种用于细胞免疫治疗的RFF1细胞，联合多肽冲击及体外共培，将普通T细胞改造为攻防兼备的超级T细胞，解决了免疫细胞在细胞免疫治疗中攻防不能兼顾的问题，精准性好、杀伤率高。

本发明提供一种用于细胞免疫治疗的RFF1细胞，其中所述RFF1细胞的制备方法包括以下步骤：

S1)PBMC细胞负载致肿瘤突变的多肽，而后对负载多肽后的PBMC细胞进行一次多肽冲击；

S2)冲击后扩大培养，以得到FF细胞；

S3)以致肿瘤突变的多肽作为抗原直接刺激所述FF细胞以筛选精准多肽；

S4)敲除PBMC细胞上的免疫抑制性信号分子，所述信号分子包括：PD-1、Tim-3、LAG3、CTLA-4、BTLA、VISTA、CD160、TIGIT、2B4(CD244)；

S5)以筛选的精准多肽负载PBMC细胞，再与敲除免疫抑制性信号分子的PBMC细胞混合，共培养；

S6)在共培过程中，用精准多肽进行多次多肽冲击；

S7)冲击后继续培养，得到RFF1细胞。

进一步地，步骤S2包括：

将多肽冲击后的PBMC细胞在预铺细胞刺激因子OKM-25的细胞培养装置中培养；

培养一段时间后，转移至含有培养液OKM-100+12％FBS的细胞培养装置中继续培养；

培养一段时间后，再转移至含有培养液OKM-200+5％FBS的细胞培养装置中继续培养。

进一步地，步骤S5中，负载多肽后的PBMC细胞与敲除免疫抑制性信号分子的PBMC细胞以1:1～1:20的比例混合。

进一步地，步骤S6中，在共培过程中，重复多肽冲击3～4次。