[发明专利]一种MRFFT1细胞

权利要求书

1.一种MRFFT1细胞，其特征在于，所述MRFFT1细胞由以下步骤制备：1)使用肿瘤患者的人源外周血进行ctDNA测序或肿瘤组织进行全外显子测序，筛选出突变位点；2)根据突变位点进行抗原表位预测，合成突变多肽的基因序列；3)构建表达突变多肽的MVA病毒载体，包装MVA病毒；4)转染抗原递呈细胞并与PBMC共培养，获得MFF细胞；5)所述突变多肽作为抗原刺激所述MFF细胞，筛选出有效的精准多肽；所述精准多肽评判标准：设置阳性对照：T细胞+100ng/mL OKT3；阴性对照：T细胞+1640+10％FBS+200U/mLIL2；a.阳性对照和阴性对照正常，则说明此数据可信；b.实验组IFN-γ的释放量显著大于阴性对照组的为有效的精准多肽；6)以所述精准多肽作为抗原刺激所述MFF细胞，筛选出能够识别所述精准多肽的特异性细胞，测序并得到特异性细胞的高频TCR基因；7)敲除外周血T细胞中原有的TCR基因，转入上步获得的能够与精准多肽特异性结合的TCR基因，获得TCR-T细胞；8)敲除细胞表面免疫抑制性信号分子，即得MRFFT1细胞。

2.如权利要求1所述的MRFFT1细胞，其特征在于，所述肿瘤患者的人源外周血采用市售工程细胞系替代。

3.如权利要求1所述的MRFFT1细胞，其特征在于，所述抗原表位预测是以突变的氨基酸位点为中心，向两侧各延伸8个氨基酸，将这段17个氨基酸的多肽作为潜在抗原表位；使用预测软件分析潜在抗原表位的IC50，IC50＜1000nM则认为此潜在抗原表位为抗原表位。

4.如权利要求1所述的MRFFT1细胞，其特征在于，所述敲除外周血T细胞中原有的TCR基因和/或细胞表面免疫抑制性信号分子的方法为CRISPR技术。

5.如权利要求1所述的MRFFT1细胞，其特征在于，所述细胞表面抑制性信号分子包括：PD-1、Tim-3、LAG3、CTLA-4、BTLA、VISTA、CD160、2B4(CD244)。

6.如权利要求1所述的MRFFT1细胞，其特征在于，所述抗原递呈细胞包括：外周血单个核细胞、树突状细胞、中性粒细胞、B淋巴细胞、巨噬细胞。