[发明专利]一种HAFFT1细胞的构建方法在审
| 申请号： | 201811153258.X | 申请日： | 2018-09-30 |
| 公开（公告）号： | CN109136282A | 公开（公告）日： | 2019-01-04 |
| 发明（设计）人： | 焦顺昌;张嵘;张天赋;周子珊;陈小彬;李营营;彭刚 | 申请（专利权）人： | 北京鼎成肽源生物技术有限公司;焦顺昌 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N5/10 |
| 代理公司： | 北京瑞盛铭杰知识产权代理事务所(普通合伙) 11617 | 代理人： | 栗华楠 |
| 地址： | 100096 北京市昌平区*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 细胞 构建 生物技术领域 特异性杀伤 方案改造 免疫抑制 体内抑制 肿瘤抗原 肿瘤细胞 小分子 靶点 多肽 敲除 修饰 改造 刺激 | ||
1.一种HAFFT1细胞的构建方法，其特征在于，所述HAFFT1细胞的构建方法包括以下步骤：1)抽取患者外周血，进行ctDNA外显子测序，或者以肿瘤组织进行全外显子测序，筛选出突变位点，进行抗原表位预测，合成突变多肽并进行小分子修饰；2)使用外周血制备永生化DC，并负载所述经小分子修饰过的突变多肽，与PBMC共孵育，获得HAFF细胞；3)用所述经小分子修饰过的突变多肽作为抗原刺激所述HAFF细胞，筛选获得精准多肽；4)以所述精准多肽负载永生化DC细胞与PBMC共孵育，制备HAFF’细胞；5)以所述精准多肽作为抗原刺激HAFF’细胞，筛选获得能够识别所述精准多肽的特异性T细胞，通过测序得到特异性细胞的高频TCR，敲除原有TCR并进行高频TCR的表达，构建TCR-T细胞；6)将上述TCR-T细胞进行抑制性信号分子的敲除，制备得到HAFFT1细胞。
2.权利要求1所述HAFFT1细胞的构建方法，其特征在于，所述患者外周血也可以是市售工程细胞系。
3.权利要求1所述HAFFT1细胞的构建方法，其特征在于，所述抗原表位的预测是以突变的氨基酸位点为中心，向两侧延伸8个氨基酸，作为潜在抗原表位。
4.权利要求1所述HAFFT1细胞的构建方法，其特征在于，所述敲除患者外周血细胞的TCR基因的方法优选为CRISPR技术。
5.权利要求1所述HAFFT1细胞的构建方法，其特征在于，所述表面免疫抑制性信号分子包括：PD-1、Tim-3、LAG3、CTLA-4、BTLA、VISTA、CD160、2B4(CD244)、TIGIT。
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