[发明专利]一种腈菌唑胶体金检测试纸条及其制备方法与应用

说明书

本发明公开一种腈菌唑胶体金检测试纸条及其制备方法与应用。所述检测试纸条的样品吸收垫、结合物释放垫和反应膜从左至右、从上至下依次结合在PVC底板同一面，结合物释放垫与反应膜的一端重叠，吸水垫结合在反应膜另一端，反应膜包被腈菌唑抗原构成的检测线和包被二抗构成的质控线，结合物释放垫包被腈菌唑抗体‑胶体金标记物。制备方法包括腈菌唑抗原制备、腈菌唑多克隆抗体制备、胶体金制备、腈菌唑多克隆抗体‑胶体金标记物制备、羊抗兔抗抗体制备、胶体金检测试纸条组装步骤。应用是腈菌唑胶体金检测试纸条用于检测植物组织中腈菌唑。本发明检测简单、快速、准确，能同时检测大批量样本，满足烟草等植物组织中腈菌唑残留快速检测的需求。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种腈菌唑胶体金检测试纸条及其制备方法与应用。

背景技术

腈菌唑，通用名称：Myclobutanil，是一类具保护和治疗活性的内吸性三唑类杀菌剂。罗门哈斯公司于1988年开发出腈菌唑产品，并用于一系列作物的杀菌防治。腈菌唑主要对病原菌的麦角甾醇的生物合成起抑制作用，对子囊菌、担子菌均具有较好的防治效果，具有强内吸，药效高，持效期长等特点，多用于防治白粉病、锈病、黑星病，灰斑病、褐斑病、黑穗病。我国是烟草大国，随着烟草品种和数量的不断增加，烟草病虫害的发生也日益加重，腈菌唑作为防治烟草病虫害的重要药剂，在我国被广泛使用。

腈菌唑药物不合理使用会造成药物残留，人们如果长时间摄入食物中残留的腈菌唑药物，会对人体造成不良影响，主要表现在损害神经系统，降低生物体的免疫能力诱发肿瘤等，因此必须重视药草中腈菌唑药物的残留问题。

目前，我国有报道采用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）检测烟草中腈菌唑残留量；气相色谱串联质谱（GC-MS/MS）测定大葱、烟草、西红柿、化妆品上腈菌唑的残留。但超高效液相色谱串联质谱、气相色谱串联质谱检测均易受杂质干扰影响，需要复杂的样品前处理过程，检测过程中所用的大量溶剂易污染环境，且所需检测时间长，对检测人员的专业能力要求高。由于烟草成分复杂，诸如烟碱含量可达1～3%，而且烟叶中蛋白质含量也非常高，一般可达15%，最多可达到17%，造成干扰物质多，现有技术中的检测方法不能有效去除烟叶中的烟碱和蛋白质等杂质，而烟碱和蛋白质的存在容易形成干扰峰，影响对目标物的检测准确性，因此不能完全适用于烟草的测定。

发明内容

本发明针对现有技术存在的问题及不足，提供了一种腈菌唑胶体金检测试纸条，还提供了一种腈菌唑胶体金检测试纸条的制备方法，进一步提供了一种腈菌唑胶体金检测试纸条的应用。

本发明的腈菌唑胶体金检测试纸条是这样实现的：样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫、PVC底板，所述样品吸收垫、结合物释放垫和反应膜按从左至右、从上至下的顺序依次结合在PVC底板的同一面上，所述结合物释放垫与反应膜的一端重叠，所述吸水垫结合在反应膜的另一端，其特征在于所述反应膜包被有腈菌唑抗原构成的检测线和包被二抗构成的质控线，所述结合物释放垫上包被有腈菌唑抗体-胶体金标记物。

本发明的腈菌唑胶体金检测试纸条的制备方法是这样实现的：包括腈菌唑抗原制备、腈菌唑多克隆抗体制备、胶体金制备、腈菌唑多克隆抗体-胶体金标记物制备、羊抗兔抗抗体制备、胶体金检测试纸条组装步骤，具体包括：

A、腈菌唑抗原制备：

A1、称取腈菌唑1.45 g溶解于2 mL二氯甲烷中，分别再加入2.5 mL的30wt%过氧化氢水溶液、四丁基硫酸氢铵0.34 g和20wt%氢氧化钠水溶液1.9 mL，反应混合物在室温下1000～2000 rpm搅拌24 h，然后用5 mL二氯甲烷稀释，TLC分离，5×2 mL盐水水洗，收集沉淀的白色固体Ⅰ；