[发明专利]检测NAT2基因突变分型的引物、试剂盒和方法

说明书

本发明公开了一种检测与异烟肼等药物代谢有关的NAT2(N‑acetyltransferase 2,NAT2)基因突变分型的引物和方法，其包括扩增检测核苷酸序列的2对引物；采用PCR扩增技术和Sanger测序技术。本发明可快速地将NAT2基因突变分型检测出来，并可判断其代谢表型。利用本发明完成的检测结果准确，在抗结核治疗时，可结合患者NAT2基因型的不同或代谢表型实施个体化治疗方案。

技术领域

本发明属生命科学和生物技术领域，特别涉及检测与异烟肼等药物代谢有关的NAT2基因分型的引物和方法。

背景技术

结核病(TB)是由结核分枝杆菌引起的以肺部病变为主的慢性传染性疾病。近年来其发病率在全球范围内都有升高的趋势。在WHO推荐的标准抗结核化疗方案中，异烟肼是不可替代的一线抗结核药，其常见的不良反应有肝损伤、胃肠道反应和皮疹等。抗结核药物诱导的肝损伤(anti-tuberculosisdrug-induced hepatotoxicity,ATDH)在结核病标准治疗中发生率约为2％～28％，是结核患者停止化疗的最常见原因之一。ATDH如果没有及时发现并停止用药，将导致患者肝衰竭甚至死亡。

异烟肼为胺类化合物，在体内通过N-乙酰基转移酶2(N-acetyltransferase 2,NAT2)代谢，最终产生无毒的乙酰肼及二乙酰肼。N-乙酰基转移酶2由NAT2基因编码，是药物二相代谢酶，催化乙酰基团从乙酰CoA转移到其作用底物芳香胺及杂环胺类物质上，在人体对芳香胺类及杂环类物质的活化和(或)灭活以及某些药物的代谢过程中起着重要的作用。

NAT2基因的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)可引起相应代谢酶含量或酶活性的改变，从而影响个体的药物代谢能力。NAT2基因多态性由其编码区的点突变所造成，根据野生型与突变型的组合形成不同的基因型：野生纯合的快乙酰型、野生突变杂合的中间型、突变纯合的慢乙酰型。研究发现快代谢型患者中极少出现药物性肝损伤，慢代谢型患者较易出现药物性肝损伤。

因此，在抗结核治疗时，结合患者NAT2基因型的不同或代谢表型实施个体化治疗方案：对慢代谢型患者，在治疗初期减少异烟肼的用量，可减少药物不良反应，提高患者依从性；对快代谢型患者，则适当增加异烟肼剂量，可提高早期疗效。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测NAT2基因突变分型的引物，采用PCR技术，可用于快速检测结核病患者NAT2基因分型并判断患者的代谢表型。

检测NAT2基因突变分型的引物，其特征在于所使用的扩增引物和测序引物均为：

NAT2-1-F：CGAGGAAATCAAATGCTAAAG

NAT2-1-R：GCTCTCTCCTGATTTGGTCC

NAT2-2-F：AGGATCAGCCTCAGGTGC

NAT2-2-R：TTTTATGGATGAAAGTATTTGATG。

本发明还提供了检测NAT2基因突变分型的试剂盒，包括

①血液样本DNA抽提试剂；

②检测体系PCR扩增反应试剂；包括扩增引物

③测序体系试剂；包括测序引物；

④阳性对照品和阴性对照品。

其中，扩增引物和测序引物碱基序列均为：

NAT2-1-F：CGAGGAAATCAAATGCTAAAG

NAT2-1-R：GCTCTCTCCTGATTTGGTCC

NAT2-2-F：AGGATCAGCCTCAGGTGC