[发明专利]增强抗PSCA嵌合抗原受体活性的人源化抗体及其应用

说明书

本发明属于基因工程领域，具体涉及一种增强抗PSCA嵌合抗原受体活性的人源化抗体及其应用。本发明所述的人源化抗体识别PSCA并且能够增强抗PSCA嵌合抗原受体的抗肿瘤活性。进一步该人源化抗体组合的嵌合抗原受体，可以稳定表达于病人来源的T淋巴细胞，未经PSCA阳性靶细胞刺激不会发生自激活现象并且具有更好的清除肿瘤细胞的能力，用于针对实体瘤的过继细胞治疗。

技术领域

本发明属于基因工程领域，涉及一种增强抗PSCA嵌合抗原受体活性的人源化抗体及其应用，还涉及包含所述抗体的识别PSCA的嵌合抗原受体。

背景技术

嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，CAR)是模拟TCR功能的人工受体，由抗原识别域、铰链区、跨膜区及胞内信号域依次连接组成。胞内信号域通常为CD3ζ链或FcRγ，或与一种或多种共刺激分子相连，如4-1BB (CD137)，CD28，ICOS(CD278)。肿瘤细胞表面的抗原(受体)与嵌合抗原受体的抗体(配体)结合时，通过铰链区和跨膜区将信号传递至胞内，胞内信号域将信号转化为活化信号，激活效应细胞，效应细胞增殖、产生细胞因子从而杀伤肿瘤细胞。

近年来，T淋巴细胞嵌合抗原受体（CAR-T）在肿瘤治疗中展现了显著的治疗效果尤其是治疗CD19阳性的恶相肿瘤或者白血病方面；利用CAR-T进行实体瘤的研究也不断得到重视，但是大多数CAR-T治疗实体瘤的效果却并不令人满意。在CAR-T的治疗中相对于杀伤肿瘤的能力，安全性和CAR-T能否有效的识别肿瘤细胞是更重要的因素，发明人团队通过前期研究发现了2个较为适合作为靶向PSCA CAR抗原识别区的鼠源抗体，在高效靶比时均对PSCA阳性肿瘤细胞有较高杀伤，但在低效靶比时杀伤较弱；发明人团队还发现大多数鼠源抗体组合的CAR-T细胞在体外正常培养时存在自激活的可能，而CAR-T细胞自激活问题也是威胁CAR-T安全性的关键问题之一，目前关于CAR-T自激活还没有很好地解决方案，是否铰链区还是scFv的选择或人源化程度会对CAR-T细胞自激活有影响也未见报道，是否自激活是影响CAR-T细胞杀伤活性的一大因素也还未确认。

综上所述，通过改造scFv获得更强有效性的CAR及CAR-T，寻求降低CAR-T自激活的解决方案，对于CAR-T实体瘤治疗很有必要。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种识别PSCA的人源化单链抗体，本发明所述的人源化单链抗体能够增强靶抗PSCA CAR-T活性，降低CAR-T细胞自激活作用，只有在PSCA阳性靶细胞刺激下才会激活对靶细胞进行清除。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

识别PSCA的人源化单链抗体，由鼠抗人PSCA的单克隆抗体轻、重链的6段FR区氨基酸序列经过IMGT/BLAST数据库经序列分析及比对，选择同源性最高人抗体序列作为改造模板；对人源化改造的序列进行PCR定点突变。

人源化抗体是指抗体的可变区部分（即VH和VL区）或抗体全部由人类抗体基因所编码。人源化抗体可以大大减少异源抗体对人类机体造成的免疫副反应，人源化抗体的形式也从最初的嵌合抗体、改型抗体等逐步发展为人源化抗体。但是常规的CDR移植的人源化改造方法通常会导致改造的抗体失去原有抗原结合活性，因此需要对影响抗原抗体结合的关键残基进行反复修改，而后通过大量抗原抗体结合特异性、亲和力检测，从而筛选得到具有活性的抗体序列。

因此，本发明的目的之一，在于提供一种识别PSCA的人源化单链抗体。

所述识别PSCA的人源化单链抗体（scFv）的轻链氨基酸序列如SEQ ID NO:22所示，所述人源化单链抗体的重链氨基酸序列如SEQ ID NO:23所示。

进一步，所述的人源化抗体氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示。

进一步，所述人源化抗体核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。