[发明专利]一种装载ABCA1 mRNA的外泌体及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种装载ABCA1mRNA的外泌体构建方法，包括以下步骤：

(1)构建ABCA1融合表达载体，所述ABCA1融合表达载体包括ABCA1的CDS序列与串联的RNA结合蛋白识别序列；

(2)构建CD9融合表达载体，所述CD9融合表达载体包括膜蛋白CD9的CDS序列和RNA结合蛋白编码基因；

(3)将ABCA1融合表达载体与CD9融合表达载体共转染至肝细胞，培养转染后肝细胞，收集外泌体，即得装载ABCA1mRNA的外泌体；

所述串联的RNA结合蛋白识别序列选自RNA结合蛋白反应元件AREs：

当所述串联的RNA结合蛋白识别序列为RNA结合蛋白反应元件AREs时，所述RNA结合蛋白编码基因为RNA结合蛋白HuR编码基因。

2.根据权利要求1所述装载ABCA1mRNA的外泌体构建方法，其特征在于，所述RNA结合蛋白反应元件AREs的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

3.根据权利要求2所述装载ABCA1mRNA的外泌体构建方法，其特征在于，当所述串联的RNA结合蛋白识别序列为RNA结合蛋白反应元件AREs时：

ABCA1融合表达载体包括ABCA1-AREs融合基因，所述ABCA1-AREs融合基因的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；

CD9融合表达载体包括CD9-HuR融合基因，所述CD9-HuR融合基因的核苷酸序列如SEQID No.6所示。

4.根据权利要求1所述装载ABCA1mRNA的外泌体构建方法，其特征在于，所述ABCA1融合表达载体和/或CD9融合表达载体以真核表达载体为骨架，所述真核表达载体独立地选自pcDNA3.1(-)、pcDNA3.1(+)、pWPI或pEGFP-N。

5.根据权利要求1所述装载ABCA1mRNA的外泌体构建方法，其特征在于，所述步骤(3)中，肝细胞选自原代培养的肝细胞或永生化的肝细胞。

6.根据权利要求3或5所述装载ABCA1mRNA的外泌体构建方法，其特征在于，所述步骤(3)中，转染时ABCA1-AREs表达载体和CD9-HuR表达载体的数量比为0.5～1.5:0.5～1.5。

7.根据权利要求1或5所述装载ABCA1mRNA的外泌体构建方法，其特征在于，所述步骤(3)中，所述转染后肝细胞培养48～72h时，收集外泌体。

8.根据权利要求1或5所述装载ABCA1mRNA的外泌体构建方法，其特征在于，所述步骤(3)中，收集外泌体的方法包括PEG沉淀法、差速离心法或密度分离法。

9.权利要求1～8任意一项所述方法构建的装载ABCA1mRNA的外泌体。

10.权利要求1～8任意一项所述方法构建的装载ABCA1mRNA的外泌体或权利要求9所述装载ABCA1mRNA的外泌体在制备预防或治疗粥样动脉硬化的药物中的应用。