[发明专利]糖化蛋白质的测定

说明书

涉及一种糖化蛋白质的测定，并提供一种由酶法进行的糖化蛋白质的测定方法，在该测定方法中工序被简化。一个方式中，涉及一种试样中的糖化蛋白质的测定方法，包括：(1)使试样中的蛋白质变性；(2)通过试样中的糖化蛋白质与阿马道里酶的反应，使显色剂显色；(3)测定(1)和(2)之后的试样的显色信号，并计算糖化蛋白质量，其中，为了进行上述(2)和(3)而与试样混合的试剂是一个。

技术领域

本公开涉及糖化蛋白质的测定，更具体而言，涉及使用阿马道里酶的糖化蛋白质的测定方法、装置、系统。

背景技术

由于当蛋白质与葡萄糖等糖共存时形成阿马多利化合物，因此能够通过阿马多利化合物量的测定来知道糖的量。关于糖的量，在人或动物的血液中、食品等中测定。

糖化蛋白质量的测定尤其在糖尿病的诊断、治疗中是重要的。作为糖化蛋白质量的测定方法，存在仅仅测定糖化蛋白质量的方法、测定糖化蛋白质量和蛋白质量而计算比率的方法等，关于作为对象的蛋白质，还存在没有特别限制的情况、局限于特定蛋白质的情况、局限于特定蛋白质的特定部位的情况。

作为这样的糖化蛋白质量的测定，存在果糖胺、糖化白蛋白、糖化血红蛋白以及血红蛋白A1c等。

例如，关于果糖胺，测定血清、血浆中的蛋白质或白蛋白的糖化量，关于糖化白蛋白，测定血清、血浆中的白蛋白的糖化量与白蛋白量之间的比率。关于糖化血红蛋白，测定血液中的血红蛋白的糖化量、或者与血红蛋白量之间的比率。关于血红蛋白A1c，测定血液中的血红蛋白的β链N末端糖化量(HbA1c量)、或者与血红蛋白量之间的比率。

作为这些糖化蛋白质的测定方法，使用了与糖化氨基酸、糖化肽反应的阿马道里酶的酶法通常被使用。

日本专利3034698中示出果糖胺的测定法、日本专利4341809以及日本专利特开2008-295305中示出糖化白蛋白的测定法，日本专利5878096等中示出仅针对糖化血红蛋白量的测定法。

其中，糖化血红蛋白比率的测定在糖尿病的诊断、治疗中是重要的。作为糖化血红蛋白之一的血红蛋白A1c(HbA1c)的测定尤其被广泛测定。

为了糖化血红蛋白比率的测定，广泛使用测定糖化血红蛋白量与血红蛋白量的方法。

作为糖化血红蛋白量的测定方法，使用了与糖化氨基酸、糖化肽反应的阿马道里酶的酶法通常被使用。作为阿马道里酶，存在生成过氧化氢等的果糖基肽氧化酶(日本专利4231668)、提高了脱氢酶活性的果糖基肽脱氢酶(WO2016-63984)等。

用于现有的酶法中的阿马道里酶具有从糖化氨基酸对糖化肽的基质特异性。因此，在通过阿马道里酶来测定糖化血红蛋白量的情况下，有必要通过蛋白酶等来预先处理糖化血红蛋白而分解成糖化氨基酸、糖化肽，以使得阿马道里酶容易作用(WO2006-120976)。在通过蛋白酶来分解糖化血红蛋白的情况下，由于用于测定的阿马道里酶不会被蛋白酶分解，有必要调制成其他试剂。

另一方面，由于因Hb与试剂(尤其蛋白酶)反应而Hb的色调变化、以及通过阿马道里酶的作用而根据糖化血红蛋白浓度生成的显色染料与Hb的色调重叠从而对糖化血红蛋白值带来影响等，因此难以在试样、阿马道里酶以及蛋白酶混合之后测定血红蛋白量。

作为由酶法进行的糖化血红蛋白量的测定的试剂，当前使用双试剂系统或三试剂系统的试剂。作为双试剂系统的试剂的构成，可以举出以下的构成1～4。

构成1

第一试剂：阿马道里酶、缓冲剂

第二试剂：蛋白酶、显色剂、缓冲剂

构成2

第一试剂：蛋白酶、缓冲剂

第二试剂：阿马道里酶、显色剂、缓冲剂

构成3