[发明专利]一种人类微卫星不稳定性状态MSI检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种人类微卫星不稳定性状态MSI检测试剂盒，其特征在于：所述的检测试剂盒包括针对六个单核苷酸重复位点和三个对照位点检测的引物，所述的检测引物如下：

BAT-25-Fo：FAM-CTCGCCTCCAAGAATGTAAGT

BAT-25-Re：ctatggctctaaaatgctctgttc

BAT-26-Fo：TAMRA-TGACTACTTTTGACTTCAGCC

BAT-26-Re：AACCATTCAACATTTTTAACCC

NR-21-Fo：VIC-CTTTCTGGTCACTCGCGTTTACAA

NR-21-Re：AAGGGGAGGTAAAGGCAGTCTC

NR-24-Fo：VIC-GCTGAATTTTACCTCCTGAC

NR-24-Re：GGAGATTGTGCCATTGCA

NR-27-Fo：FAM-AACCATGCTTGCAAACCACT

NR-27-Re：TGAGTCGATAATACTAGCAATGACC

MONO-27-Fo：TAMRA-AAGGGTGGATCAAATTTCACTTG

MONO-27-Re：TGGGAGACAGAGCAAGACTCTG

PentaC-Fo：VIC-gaacacactttgcacctgtcag

PentaC-Re：CTGAGCGCTTCTAGGGACTTCT

PentaD-Fo：TAMRA-atttgcctaacctatggtCATAACG

PentaD-Re：ACACTCCAGCCTAGGTGACAGA

Amel-Fo：FAM-ccctgggctctgtaaagaatag

Amel-Re：TTGAGGCCAACCATCAGAGCTTA。

2.根据权利要求1所述的人类微卫星不稳定性状态MSI检测试剂盒，其特征在于：所述的检测试剂盒包括MSI引物混合液、PCR预混液、阴性对照品、阳性对照品；

所述的MSI引物混合液包含用于检测6个单核苷酸重复位点和2个五核苷酸重复位点及1个性别鉴定基因的引物，6个单核苷酸重复位点分别为BAT-25、BAT-26、NR-21、NR-24、NR-27、MONO-27，2个五核苷酸重复位点为PentaC、PentaD，性别鉴定基因为Amel；

所述的PCR预混液包括UDG酶、DNA聚合酶、PCR buffer、MgCl2、dNTPs和dUTP；

所述的阴性对照品为灭菌超纯水；

所述的阳性对照品为细胞系HT-29基因组DNA。

3.一种人类微卫星不稳定性状态MSI的检测方法，其特征在于：所述的检测方法包括使用人类微卫星不稳定性状态MSI的引物或检测人类微卫星不稳定性状态MSI的试剂盒检测人类微卫星不稳定性状态的步骤；

所述检测方法采用多重荧光定量PCR技术结合毛细管电泳进行序列片段分析人类细胞中微卫星不稳定状态，具体步骤如下：

步骤一、提取待检的同一个体的肿瘤样本和对照样本DNA，作为检测模板；

步骤二、荧光PCR扩增

根据待检测样本数，计算并配制反应混合液，将配制好的检测反应液分别分装到八联PCR反应管；

步骤三、分别将待检样本、阳性对照品、阴性对照品加入到对应PCR反应管中；

步骤四、进行多重荧光定量PCR检测，多重PCR扩增程序为：37℃2分钟；94℃10分钟；94℃30秒，60℃1分钟，70℃1分钟，35个循环；60℃45分钟；4℃∞；

步骤五、荧光PCR产物毛细管电泳；

制备毛细管样品，以基因分析仪进行毛细管电泳检测；

步骤六、检测数据分析

检测数据使用分析软件进行数据分析，根据判定标准判定微卫星不稳定状态。