[发明专利]一种基于颜色判断的三(单)不饱和漆酚分离纯化方法

说明书

一种C15三(单)不饱和漆酚分离纯化的方法，其步骤为将新鲜生漆在氮(氩、二氧化碳)气等惰性气体保护氛围中溶解于甲(乙)醇或乙酸乙酯等极性溶剂中，超声溶解；100～300目硅胶作为填料进行柱层析分离，洗脱剂选用乙酸乙酯和石油醚，按总体积500，乙酸乙酯体积为50～10混合洗脱，以色带变化作为参考，收集第一次和第二次流出的粉红色带洗脱液，洗脱液经浓缩得到高纯度的三(单)不饱和漆酚标准品：由本发明方法制备的三(单)不饱和漆酚收率较高、纯度达到95％以上，方法操作简单、低毒环保。

技术领域

本发明涉及天然产物分离纯化领域，具体涉及一种三(单)不饱和漆酚分离纯化方法。利用本发明的方法可以高效分离两种已知的、经济价值较高的漆酚林化产品。

背景技术

中国有着丰富的漆树资源，生漆为“涂料之王”，由于目前生漆市场混乱，作假行为扰乱了生漆市场本来规范的市场秩序。三不饱和漆酚作为生漆中含量最高的漆酚，其生物活性最高，标准品难以制得。目前国内外科研机构，均是自行制备三不饱和漆酚标准品，但制备耗能较大，且制备得到的漆酚易氧化、自聚。

当下三不饱和漆酚标准品的纯化往往采用柱层析分离纯化方法，其中采用苯、丙酮等毒性较大溶剂和洗脱，由于苯和丙酮的挥发性比较大，毒性较大，浓度不易控制，所得产品纯度不高，不是一种安全可靠的分离纯化方法：寻求一种高效优质的三不饱和漆酚分离纯化方法是目前生漆市场的形势所需。

文献《生漆中C15三烯漆酚的分离制备》(2016.09.25吉首大学学报)介绍了一种三不饱和漆酚的制备与纯化方法，其中提到了将粗品纯化过程中“将浓缩生漆先经梯度淋洗，梯度收集三不饱和漆酚粗品；而后在低温环境，继续细化洗脱剂梯度分离得到纯品粗品三不饱和漆酚。”即目前国内流行的利用硅胶、MCI和ODS等多种分离填料进行三烯漆酚的分离制备，运用乙酸乙酯(甲醇)：石油醚梯度洗脱，TLC点板观察制备粗品三不饱和漆酚，继而通过细化洗脱梯度得到的三不饱和漆酚标准品的纯度仅在95％左右，且售价、成本较高。

由于大量使用有机洗脱剂，暴露空气中很容易扩散。工作人员大量接触有机溶剂，会造成一定的身体不适。且层析填料种类较多，不利于大规模三不饱和漆酚的制备。

甲醇是无色有酒精气味易挥发的液体。人口服中毒最低剂量约为100mg/kg体重，经口摄入0.3～1g/kg可致死。故试验中因尽量减少甲醇的使用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种方法极佳，绿色环保的三不饱和漆酚分离纯化方法，即用石油醚作溶剂，乙酸乙酯作洗脱剂，可一次性分离纯化制备出批量较大的三不饱和漆酚，而且得到的三不饱和漆酚的纯度可达95％以上，完全满足作为三不饱和漆酚标准品的要求。

为实现本发明目的，采用的技术方案为：

一种三不饱和漆酚分离纯化方法，其特征在于包括以下步骤：

a溶解：将新鲜生漆(三不饱和漆酚含量为浓缩漆酚50％以上)用甲醇充分溶解，溶解时生漆与甲醇质量体积比为50∶200～400(g∶mL)；

b装柱：采用层析柱分离纯化，层析柱选用200～300目硅胶，硅胶与浓缩漆酚的质量比为3～4∶1，装柱时采用湿法装柱；

c层析：把溶解后的浓缩漆酚溶液进行柱层析，流速控制在10～15ml/min，洗脱剂采用乙酸乙酯和石油醚，总体积为500ml，乙酸乙酯体积从50ml到最终10ml。

d颜色：随着洗脱剂极性从大到小，观察层析柱硅胶色带变化，层析柱颜色至上而下分别为黑色-黄色-红色。

e浓缩：把收集到的浅粉红色色带区域的洗脱液进行负压浓缩得到高纯度酒红色粘稠三不饱和漆酚粘稠液。

进一步地，所述a步骤溶解过程中，采用抽真空，氮气保护氛围。