[发明专利]一种用于敲除CCR5基因的gRNA、gRNA组合物和CRISPR-Cas9系统及其用途在审
| 申请号： | 201811165368.8 | 申请日： | 2018-09-30 |
| 公开（公告）号： | CN109402116A | 公开（公告）日： | 2019-03-01 |
| 发明（设计）人： | 祝海宝;罗思施;陶米林;黄雨亭;阮锦辉 | 申请（专利权）人： | 广东赤萌医疗科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/90;C12N15/85;C12N15/866;C12N15/12;A61K48/00;A61P31/18 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 宋静娜;郝传鑫 |
| 地址： | 510000 广东省广州市高新*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 敲除 突变 基因治疗技术 设计和操作 表达载体 辅助受体 人体细胞 有效实现 可用 切割 艾滋病 开发 | ||
1.一种用于敲除CCR5基因的gRNA，其特征在于，所述gRNA的靶序列如SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:25中的一种所示。
2.根据权利要求1所述的gRNA，其特征在于，所述gRNA的靶序列如SEQ ID NO:3、SEQ IDNO:6、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ IDNO:20、SEQ ID NO:21中的一种所示。
3.一种用于敲除CCR5基因的gRNA组合物，其特征在于，所述gRNA组合物由靶序列如SEQID NO:11所示的gRNA和靶序列如SEQ ID NO:20所示的gRNA组成，或由靶序列如SEQ ID NO:11所示的gRNA和靶序列如SEQ ID NO:18所示的gRNA组成，或由靶序列如SEQ ID NO:12所示的gRNA和靶序列如SEQ ID NO:20所示的gRNA组成，或由靶序列如SEQ ID NO:17所示的gRNA和靶序列如SEQ ID NO:20所示的gRNA组成，或由靶序列如SEQ ID NO:17所示的gRNA和靶序列如SEQ ID NO:21所示的gRNA组成，或由靶序列如SEQ ID NO:20所示的gRNA和靶序列如SEQ ID NO:21所示的gRNA组成。
4.一种用于敲除CCR5基因的表达载体，其特征在于，所述表达载体是将如权利要求1或2所述的gRNA的DNA序列、或者如权利要求3所述的gRNA组合物的DNA序列连接到基础载体上而得的，所述表达载体表达如权利要求1或2所述的gRNA、或者表达如权利要求3所述的gRNA组合物。
5.一种用于敲除CCR5基因的CRISPR-Cas9系统，其特征在于，包括如权利要求1或2所述的gRNA、或者如权利要求3所述的gRNA组合物，以及Cas9蛋白。
6.根据权利要求5所述的CRISPR-Cas9系统，其特征在于，所述Cas9蛋白为来源于金黄色酿脓葡萄球菌Staphylococcus aureus的Cas9蛋白。
7.一种用于敲除CCR5基因的试剂盒，其特征在于，包括：
(1)表达Cas9蛋白的载体、Cas9蛋白和Cas9蛋白对应的mRNA中的至少一种；以及
(2)如权利要求1或2所述的gRNA和表达如权利要求1或2所述的gRNA的载体中的至少一种，或者如权利要求3所述的gRNA组合物和表达如权利要求3所述的gRNA组合物的载体中的至少一种。
8.一种重组杆状病毒，其特征在于，所述重组杆状病毒是将如权利要求3所述的gRNA组合物的DNA序列和Staphylococcus aureus来源的Cas9蛋白的DNA序列连接到pFast-Bac表达载体上后包装到杆状病毒而得的，所述重组杆状病毒表达所述gRNA组合物和所述Cas9蛋白。
9.如权利要求1或2所述的gRNA、如权利要求3所述的gRNA组合物、如权利要求4所述的表达载体或者如权利要求5或6所述的CRISPR-Cas9系统在制备预防或治疗HIV感染的药物中的用途。
10.如权利要求8所述的重组杆状病毒在制备用于编辑哺乳动物细胞中CCR5基因的试剂中的用途。
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