[发明专利]一种金针菇多糖二维指纹图谱的构建方法

权利要求书

1.一种金针菇多糖二维指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）将新鲜金针菇子实体于50℃热风循环烘箱干燥，然后粉碎至80目，用于提取金针菇多糖；

（2）对得到的金针菇多糖进行红外光谱分析和对其酸水解产物PMP衍生化进行HPLC单糖组成分析，构建金针菇多糖的红外标准指纹图谱和HPLC标准指纹图谱；

（3）将得到的红外光谱经SNV光谱预处理后，运用主成分分析进行判别；对得到的HPLC图谱的共有峰面积数据运用主成分分析进行判别。

2.根据权利要求1所述的金针菇多糖二维指纹图谱的构建方法，其特征在于，金针菇多糖的提取步骤包括：称取一定量的金针菇粉，按照料液比1:25在80℃热水浴条件下浸提4h，8000 r/min条件下离心10min；上清液中加入Sevag试剂（正丁醇:三氯甲烷=1:4，v/v），10000r/min条件下离心15min除去蛋白，向其中加入剩余上清液体积4倍的无水乙醇沉淀过夜，离心后取沉淀用3500Da孔径规格透析袋，4℃透析72h，真空浓缩后冷冻干燥，备用。

3.根据权利要求1所述的金针菇多糖二维指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）金针菇多糖红外光谱标准指纹图谱的构建

称取3-5mg的多糖样品与100-200mg溴化钾在玛瑙研钵中混合研磨后压片，在4000cm^-1-400cm^-1波长范围，2cm^-1分辨率条件下扫描32次，根据不同品种金针菇多糖的傅里叶变换红外光谱图，得到金针菇多糖红外光谱的标准指纹图谱；

（2）金针菇多糖HPLC标准指纹图谱的构建

吸取100μL浓度为4 mg/mL的多糖溶液于具塞试管中，加入100μL 4 M三氟乙酸溶液，混匀后用N₂密封，置于110 ℃烘箱中水解120 min，冷却至室温后加入200 μL甲醇，用N₂吹干以除去残留的三氟乙酸，重复4次，将干燥的样品用100μL超纯水溶解；取100μL多糖水解液与等体积100 μL0.6 M氢氧化钠溶液混合，吸取50μL的混合溶液，加入50μL0.5 M的PMP甲醇溶液混匀，于70℃下反应100min后冷却至室温，用50μL0.3 M盐酸溶液中和，加入超纯水补齐至1mL，然后加入1 mL的三氯甲烷，涡旋静置分层后弃去有机相，重复此步骤3次，吸取水相过0.45μm微孔滤膜过滤后进行分析，得到金针菇多糖的HPLC标准指纹图谱。

4.根据权利要求3所述的金针菇多糖二维指纹图谱的构建方法，其特征在于，步骤（2）中，HPLC色谱条件为：ZORBAXEclipseXDB-C18色谱柱，4.6mm×250 mm，5μm；柱温：30℃；流速：1 mL/min；流动相：0.1 M磷酸盐（pH 6.7）缓冲液/乙腈，体积比为83:17；检测波长：250nm；进样体积：20μL。

5.根据权利要求1所述的金针菇多糖二维指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述金针菇多糖红外光谱标准指纹图谱有9个特征共同峰，分别为3383.24 cm^-1、2932.73 cm^-1、2138.10 cm^-1、1647.48 cm^-1、1422.57 cm^-1、1248.20 cm^-1、1078.69 cm^-1、889.75 cm^-1、573.52 cm^-1。