[发明专利]一种定量检测IgG4的乳胶增强免疫比浊试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种定量检测IgG4的乳胶增强免疫比浊检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括R1试剂、R2试剂、IgG4蛋白质控品、IgG4蛋白校准品；

所述的R1试剂包括缓冲液、电解质、稳定剂、表面活性剂、防腐剂；

所述的R2试剂包括包被有IgG4抗体的乳胶微球、缓冲液、稳定剂、电解质、防腐剂；

所述的IgG4蛋白质控品包括IgG4质控品蛋白和稀释液；

所述的IgG4蛋白校准品包括IgG4校准品蛋白和稀释液。

2.根据权利要求1所述的定量检测IgG4的乳胶增强免疫比浊检测试剂盒，其特征在于：所述的乳胶微球是含有聚苯乙烯的多聚物，表面含有羧基基团，粒径在50-200nm之间；

所述的IgG4抗体是通过化学交联的方法偶联到乳胶微球表面的，所述的化学交联方法是通过化学交联剂在交联缓冲液中进行的。

3.根据权利要求2所述的定量检测IgG4的乳胶增强免疫比浊检测试剂盒，其特征在于：所述化学交联剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺、N-羟基硫代琥珀酰亚胺中的一种或两种以上混合物；

所述的交联缓冲液为不含氨基的MES缓冲液、PBS缓冲液、HEPES缓冲液中的一种，缓冲液pH值为5.0-8.0。

4.根据权利要求1所述的定量检测IgG4的乳胶增强免疫比浊检测试剂盒，其特征在于：稀释液包含缓冲液、稳定剂、电解质、防腐剂。

5.根据权利要求1所述的定量检测IgG4的乳胶增强免疫比浊检测试剂盒，其特征在于：所述的IgG4校准品是高浓度单点校准品或使用稀释液梯度稀释，直接制备出不同浓度的校准品，浓度为0-10.0g/L。

6.根据权利要求1所述的定量检测IgG4的乳胶增强免疫比浊检测试剂盒，其特征在于：所述的IgG4质控品是高浓度单点质控品或使用稀释液梯度稀释，直接制备出不同浓度的质控品，浓度为0.05-5.0g/L。

7.根据权利要求1或者4所述的定量检测IgG4的乳胶增强免疫比浊检测试剂盒，其特征在于：所述电解质为氯化钠、氯化钾、磷酸氢钠、磷酸二氢钠中的一种或两种以上的混合物，浓度在0.1％-2％之间；

所述的稳定剂为酪蛋白、牛血清白蛋白、明胶、甘露醇、蔗糖、葡聚糖中的一种或两种以上的混合物，浓度在0.05％-1.0％之间；

所述的表面活性剂为吐温-20、曲拉通-100、聚醚中的一种或两种以上的混合物，浓度在0.01％-0.5％之间；

所述的防腐剂为叠氮钠、对羟基苯甲酸、Proclin300中一种，浓度在0.05％-0.1％之间。

8.根据权利要求7所述的定量检测IgG4的乳胶增强免疫比浊检测试剂盒，其特征在于：所述的电解质为氯化钠、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠，所述的稳定剂是牛血清白蛋白和明胶，所述的表面活性剂是曲拉通-100。

9.一种制备定量检测IgG4的乳胶增强免疫比浊检测试剂盒的方法，包括如下步骤：

(1)R1试剂的制备：

R1试剂包括pH为6.5-8.5的50mmol PBS缓冲液，0-5％的PEG10000，0.02％-0.1％的表面活性剂，0.02％-0.2％的防腐剂；

(2)R2试剂的制备：

将含有羧基的乳胶微球加入到50-200mmol，pH5.0-6.0的MES缓冲液，或者100-200mmol，pH6.5-7.5的PBS缓冲液中，使乳胶微球的浓度为0.1％-2.0％，加入EDC和NHS，EDC的浓度为0.02％-0.1％，NHS的浓度为0.05％-0.2％，室温搅拌10-15分钟，离心弃去上清，用100-200mmol，pH6.5-7.5的缓冲液复溶，复溶后的乳胶微球浓度为0.05％-0.5％；

取IgG4抗体，加入到活化的乳胶微球溶液中，加入抗体量与乳胶微球质量比为：10mg乳胶:0.5-2.0mg抗体；

将乳胶微球和IgG4抗体充分混匀，室温孵育反应2-4小时，加入5％的牛血清白蛋白溶液，室温孵育反应1-2小时，离心，弃去上清，用PBS缓冲液复溶，再次离心，弃去上清，用乳胶微球保存液(50-200mmol的PBS缓冲液，含防腐剂0.05％-0.1％，稳定剂0.1％-0.5％)复溶，使乳胶微球的浓度为0.05％-0.2％，即为R2试剂；

(3)稀释液的制备：

取0.1％-2％的电解质，0.05％-1.0％稳定剂，0.01％-0.5％表面活性剂，0.05％-0.1％防腐剂，加入到100mmol的缓冲液中，即为稀释液；

(4)校准品的制备：

从国内知名生物公司购买IgG4校准品抗原蛋白，用稀释液配制成不同梯度浓度的校准品，校准品浓度：0g/L、0.05g/L、0.5g/L、1.0g/L、5.0g/L、10.0g/L；

(5)质控品的制备：

从国内知名生物公司购买IgG4质控品抗原蛋白，用稀释液配制成不同梯度浓度的质控品，质控品浓度：0.05g/L、0.5g/L、5.0g/L。