[发明专利]一种用于检测山羊副流感病毒3型的双抗体夹心ELISA检测试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种用于检测山羊副流感病毒3型（CPIV3）的双抗体夹心ELISA检测试剂盒及其应用。所述的试剂盒中含有由保藏编号为CCTCC NO.C201627和CCTCC NO.C2018151的杂交瘤细胞株分泌产生的抗CPIV3单克隆抗体2E6和1F8。本发明以纯化的1F8单抗为捕获抗体，以辣根过氧化物酶标记的2E6单抗为检测抗体，建立了检测CPIV3的双抗体夹心ELISA方法。本发明构建的试剂盒检测CPIV3病原快速、稳定、特异性好、灵敏度高，可快速检测样品中是否含有CPIV3病毒粒子；本发明适用于养殖场感染CPIV3的高通量检测。

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体涉及山羊副流感病毒3型双抗体夹心ELISA检测试剂盒及其应用。

背景技术

山羊副流感病毒3型(Caprine parainfluenza virus type 3,CPIV3)属于副黏病毒科呼吸道病毒属，是有囊膜的单股负链RNA病毒，是引起羊呼吸道疾病的重要病原。本病毒于2013年底首次报道，是从江苏等地发生呼吸道疾病羊群中分离的新型副流感病毒3型，将其命名为山羊副流感病毒3型(CPIV3)。流行病学调查表明CPIV3在羊群较为普遍，可能造成发病引起较大损失。

本病毒感染羊后，以呼吸道症状为主的传染性疾病，发病率较高，药物治疗效果不佳。临床主要表现为流涕、咳嗽、精神沉郁、食欲减退、消瘦、伴有腹泻；剖检主要病变表现为肺炎、腹腔积液、肠系膜等出现白色结节、胰脏出血、肠道出血、淋巴结肿大等病理变化。本病感染率较高，可达30％以上，对养羊业造成了严重的经济损失。

此前对CPIV3病原的检测多用常规RT-PCR和qRT-PCR检测方法，需要进行病毒RNA提取等操作，操作繁杂、耗时长、成本较高，且不能高通量检测。单克隆抗体在动物病毒的诊断和防治中起重要作用。利用单克隆抗体建立的检测病原的双抗体夹心ELISA检测方法，在动物传染病的监测和预防方面发挥着越来越重要的作用。目前国内外尚无针对CPIV3病原的高通量检测方法。因此，需要提供一种简便、快速、敏感性高和特异性好的有效检测手段对大量样品进行CPIV3检测。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供一种山羊副流感病毒3型双抗体夹心ELISA检测试剂盒，该试剂盒特异性好、灵敏度高、稳定性好，可快速、简便、高效的检测山羊副流感病毒3型，且成本低，适合样品的高通量检测。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

本发明提供一种分泌CPIV 3阻断单克隆抗体的杂交瘤细胞1F8株，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C2018151，保藏日期：2018年6月26日。

本发明提供一种分泌CPIV 3阻断单克隆抗体的杂交瘤细胞2E6株，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C201627，保藏日期：2016年2月1日。

在一些实施方式中，制备CPIV 3单克隆抗体的杂交瘤细胞1F8株时，分泌CPIV 3单克隆抗体的杂交瘤细胞1F8株的抗原为CPIV3病毒JS2013株。

在一些实施方式中，免疫小鼠所用抗原首先感染MDBK细胞，待出现细胞病变后收获病毒。

在一些实施方式中，出现细胞病变后收获的病毒需经处理以去除细胞碎片。

在一些实施方式中，去除细胞碎片通过离心进行。

在一些实施方式中，所述离心操作在至少10,000rpm进行。

在一些实施方式中，所述离心操作进行至少30min。

在一些实施方式中，所述离心后的沉淀用PBS溶解。

在一些实施方式中，所述离心后的沉淀用PBS过夜溶解。