[发明专利]一种纳豆激酶、其表达载体的构建及生产方法

权利要求书

1.一种纳豆激酶表达载体，其特征在于，所述纳豆激酶表达载体为包括纳豆激酶基因序列的自主复制型表达质粒，其中纳豆激酶基因序列如SEQ ID NO.1所示；所述自主复制型表达质粒的启动子为PamyQ与PaprE从左到右的双启动子组合或者PamyQ与PnprE从左到右的双启动子组合，所述自主复制型表达质粒的启动子后连接有信号肽SPaprE。

2.一种利用权利要求1所述纳豆激酶表达载体生产纳豆激酶的方法，其特征在于，采用特定培养基进行种子培养和发酵培养，发酵过程中使用磷酸和氨水控制pH在7.6-7.8之间，通气量每升发酵液0.5L/min，转速500-700rpm，温度37度；通过发酵补料培养基补料控制生长对数期总还原糖控制在2%左右，稳定期总还原糖控制在1%左右；在发酵的 10小时后，均匀流加大豆粉溶液，直至结束；发酵时间为48-72小时，在发酵24小时后，每2小时测一次酶活，酶活出现下降趋势时结束发酵，然后将纳豆激酶纯化；

所述特定培养基包括种子培养基和发酵基料培养基，其中：种子培养基组分包括麦芽糖、葡萄糖、大豆粉、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、硫酸镁、氯化钙；发酵基料培养基组分包括葡萄糖，大豆粉，磷酸氢二钾，磷酸二氢钠，硫酸镁，氯化钙；

所述发酵补料培养基组分包括麦芽糖浆、葡萄糖、大豆粉。