[发明专利]用于检测黄嘌呤的荧光探针及其制备方法和应用

说明书

本发明公开用于检测黄嘌呤的荧光探针及其制备方法和应用。取二乙三胺五乙酸、乙酸酐和吡啶，搅拌回流，冷却，减压抽滤，洗涤，干燥；将得到的二乙三胺五乙酸二酐与三乙胺、二甲基甲酰胺、腺嘌呤和/或胞嘧啶搅拌回流，冷却，旋蒸，洗涤，干燥，将得到的中间产物与Tb(NO₃)₃·6H₂O于60℃加热搅拌2h，得到目标产物。将Tb^Ш‑dtpa‑2A，Tb^Ш‑dtpa‑2C和Tb^Ш‑dtpa‑AC分别作为探针结合荧光方法检测黄嘌呤。本发明方法简单新颖，成本低，效率高，且可应用在实际尿样当中。

技术领域

本发明属于分析化学领域，尤其涉及一种新型荧光探针的合成及其在真实尿液中检测黄嘌呤的应用。

背景技术

黄嘌呤(Xanthine)是一种广泛分布于人和其他生物体的器官和体液中的嘌呤碱，其正常的生理浓度在血清中为0.5～2.5μmol/L，在尿液中为40～160μmol/L。同时，黄嘌呤也是嘌呤代谢的产物，在黄嘌呤氧化酶的作用下转化为尿酸，最终随尿液排出体外。当体内缺乏黄嘌呤氧化酶时，黄嘌呤不能被转换而是在体内积累。导致血液和尿液中黄嘌呤浓度急剧上升，最终发展成黄嘌呤尿症。患有黄嘌呤尿症的病人可能会出现例如疲劳性肌肉疼痛，肌肉痛性痉挛或肌痉挛性尿频等症状。

茶和咖啡中含有大量由黄嘌呤衍生而来的温和的兴奋剂，如咖啡因和茶碱。然而，咖啡中的咖啡因可能诱发冠心病，这会增加高血压患者的血压和心率。此外，食品工业对肉类的新鲜程度要求很高。鱼死亡后，体内的ATP被降解为黄嘌呤，其含量随着储存时间的增加而增加。因此，鱼肉中黄嘌呤的含量也可用于评估鱼肉的新鲜程度。总而言之，黄嘌呤的检测无论是在食品领域还是在医疗领域都非常重要。

通常，用于检测黄嘌呤的方法包括比色法，电化学法，高效液相色谱法和毛细管柱气相色谱法。然而，这些方法复杂，耗时且灵敏度低。而且，在这些方法中，预处理步骤复杂并且仪器设备昂贵。众所周知，荧光探针检测方法因其设备简单，操作简便，分析速度快等优点，被广泛应用于许多领域。尤其是荧光探针法通常灵敏度高，选择性好以及检测限低。因此，开发一种能快速且准确的检测黄嘌呤的荧光探针是非常必要的。

发明内容

本发明的目的之一是设计合成可用于有效检测黄嘌呤的新型荧光探针。

本发明的目的之二是提供一种操作简单，成本低，敏感快速，且选择性好的检测黄嘌呤的方法。

本发明采用的技术方案是：用于检测黄嘌呤的荧光探针，制备方法包括如下步骤：

1)将二乙三胺五乙酸、乙酸酐和吡啶混合均匀，在65℃下搅拌回流24h，冷却至室温，减压抽滤，依次用乙酸酐和无水乙醚洗涤，60℃下干燥，得二乙三胺五乙酸二酐(dtpaa)。优选的，按摩尔比，二乙三胺五乙酸：乙酸酐：吡啶＝1:4:6。

2)将二乙三胺五乙酸二酐、三乙胺、无水DMF、腺嘌呤和/或胞嘧啶混合均匀，在100℃下搅拌回流24-48h，冷却至室温，旋转蒸发，依次用乙腈和无水乙醚洗涤，减压抽滤，于50℃干燥，得中间产物。优选的，按摩尔比，二乙三胺五乙酸二酐：三乙胺：腺嘌呤＝1:3:2；二乙三胺五乙酸二酐：三乙胺：胞嘧啶＝1:3:2；二乙三胺五乙酸二酐：三乙胺：腺嘌呤：胞嘧啶＝1:3:1:1。

3)取步骤2)获得的中间产物和Tb(NO₃)₃·6H₂O，加去离子水溶解，于60℃搅拌加热2-3h，冷却，得到用于检测黄嘌呤的荧光探针。优选的，按摩尔比，中间产物：Tb(NO₃)₃·6H₂O＝1:1。

上述的用于检测黄嘌呤的荧光探针在定性和定量检测黄嘌呤中的应用。

优选的，用于检测黄嘌呤的荧光探针在定性和定量检测尿液中黄嘌呤的应用。方法如下：