[发明专利]一种检测醛缩酶mRNA表达谱的试剂盒

权利要求书

1.一种检测醛缩酶mRNA表达谱的试剂盒，其特征在于：基于液态芯片技术，包括ALDOA正向引物、ALDOA反向引物、ALDOB正向引物、ALDOB反向引物、ALDOC正向引物、ALDOC反向引物、内标正向引物、内标反向引物、ALDOA检测探针、ALDOB检测探针、ALDOC检测探针和内标检测探针，其序列依次如SEQ ID NO 01至12所示；

其中ALDOA检测探针、ALDOB检测探针、ALDOC检测探针和内标检测探针的氨基端修饰连接有C12长臂，且分别偶联于四种不同颜色的表面带有羧基修饰的聚苯乙烯微球；

此外，还包括报告分子混合液。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述报告分子混合液中报告分子为链霉亲和素-R-藻红蛋白。

3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述报告分子混合液中链霉亲和素-R-藻红蛋白的浓度为10μg/mL。

4.如权利要求1至3中任一权利要求所述的试剂盒，其特征在于：其使用方法包括如下步骤：

(1)以临床样本cDNA为模板，用所述ALDOA正向引物、ALDOA反向引物、ALDOB正向引物、ALDOB反向引物、ALDOC正向引物、ALDOC反向引物、内标正向引物和内标反向引物在同一反应体系中进行PCR扩增，得扩增产物；

(2)将所述ALDOA检测探针、ALDOB检测探针、ALDOC检测探针和内标检测探针分别偶联于四种不同颜色的所述聚苯乙烯微球，并混合形成微球杂交反应液；

(3)将步骤(1)所得扩增产物加入到步骤(2)所得的微球杂交反应液中，于95～100℃孵育使PCR产物的二级结构变性，再于50～52℃孵育10～20min，接着加入适量所述报告分子混合液，混匀后于50～52℃孵育10～20min，得孵育产物；

(4)将步骤(3)所得的孵育产物液体芯片分析仪检测。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述步骤(1)的PCR扩增的程序为：95℃预变性10min；95℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸45s，共40个循环；72℃补齐10min。

6.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述PCR扩增的反应体系如下：

上述上下游引物包括所述ALDOA正向引物、ALDOA反向引物、ALDOB正向引物、ALDOB反向引物、ALDOC正向引物、ALDOC反向引物、内标正向引物、内标反向引物；上述PCR预混液由Taq酶、dNTPs、Mg²⁺和PCRbuffer组成。

7.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述步骤(3)为：将步骤(1)所得扩增产物加入到步骤(2)所得的微球杂交反应液中，于95～100℃孵育5min使PCR产物的二级结构变性，再于52℃孵育15min，接着加入适量所述报告分子混合液，混匀后于52℃孵育15min，得孵育产物。