[发明专利]一株耐受多种纤维素水解液抑制物的丙酮丁醇梭菌及其制备方法和应用

权利要求书

1.一株耐受多种纤维素水解液抑制物的丙酮丁醇梭菌，其特征在于：名称为丙酮丁醇梭菌(Clostridium acetobutylicum)824(proABC)，于2018年08月06日保藏于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：CGMCC NO.16223；

所述纤维素水解液抑制物为甲酸、阿魏酸、丁香醛和香豆酸中的至少一种。

2.权利要求1所述的一株耐受多种纤维素水解液抑制物的丙酮丁醇梭菌的制备方法，其特征在于：

通过构建重组表达载体，在丙酮丁醇梭菌中过表达脯氨酸合成相关基因proA、proB和proC。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)PCR扩增目的基因，包括启动子和脯氨酸合成相关基因proA、proB和proC；

(2)目的基因与载体连接；

(3)连接产物转化至大肠杆菌DH5α中；

(4)重组质粒转化至大肠杆菌TOP10(pAN2)中甲基化处理；

(5)丙酮丁醇梭菌电转化感受态细胞的制备；

(6)电转化获得丙酮丁醇梭菌重组转化子。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：

所述的丙酮丁醇梭菌为丙酮丁醇梭菌(Clostridium acetobutylicum)ATCC824。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：

所述的启动子为丙酮丁醇梭菌硫解酶启动子Pthl。

6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：

所述的脯氨酸合成相关基因proA、proB和proC的核苷酸序列，分别如SEQ ID NO:1、SEQID NO:2和SEQ ID NO:3所示。

7.权利要求1所述的耐受多种纤维素水解液抑制物的丙酮丁醇梭菌在利用纤维素生物质水解液发酵生产丁醇中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：

所述的耐受多种纤维素水解液抑制物的丙酮丁醇梭菌在利用未脱毒的纤维素生物质水解液发酵生产丁醇中的应用。

9.根据权利要求7或8所述的应用，其特征在于：

所述纤维素生物质为农业废弃物。