[发明专利]一种花生突变体的快速筛选方法及应用

权利要求书

1.一种花生突变体的快速筛选方法，其特征在于：对花生离体诱变获得的再生苗，采用SSR方法进行基因型上的突变性鉴定，淘汰基因型未突变的再生苗，鉴定的基因型突变的再生苗即为花生突变体。

2.根据权利要求1所述花生突变体的快速筛选方法，其特征在于：步骤为：

(1)提取诱变亲本花生品种和诱变后再生苗叶片的全基因组DNA，进行SSR的PCR扩增；

(2)对比诱变亲本花生和诱变后再生苗的SSR扩增结果，选择扩增结果呈现多态性的再生苗即为花生突变体，淘汰基因型未突变的再生苗。

3.根据权利要求2所述花生突变体的快速筛选方法，其特征在于：所述扩增结果呈现多态性是指扩增片段减少、扩增片段增加或扩增片段长度差异。

4.根据权利要求1～3任一项所述花生突变体的快速筛选方法，其特征在于：所述SSR的PCR扩增结果的检测方法为：

将扩增产物在8％非变性PAGE凝胶上电泳，电泳缓冲液位1×TBE，每个点样孔加1.5μL样品，200伏恒电压下电泳约90分钟，电泳结束后，进行银染检测。

5.根据权利要求4所述花生突变体的快速筛选方法，其特征在于：

所述SSR的PCR扩增体系为：模板1.5μL，Taq酶0.2μL，10×Taq buffer 7.5μL，正反向引物各0.6μL，ddH₂O 4.6μL；

所述SSR的PCR扩增反应程序为：94℃预变性3min；94℃变性13min，55℃退火1min，72℃延长90s，34个循环；72℃延长10min。

6.权利要求1～5任一项所述花生突变体的快速筛选方法在花生育种上的应用。

7.一种花生快速育种方法，其特征在于：步骤如下：

(1)选择颗粒饱满的花生种子进行诱变育种；

(2)经诱变处理的花生种子去子叶，取种胚，对种胚进行表面消毒处理；

(3)将消毒后的种胚置于无菌水中浸泡10～14h后，分离浸泡处理后种胚的胚小叶；

(4)将胚小叶作为外植体置于添加10mg/L 2,4-D的体胚诱导培养基上培养4周，诱导体胚形成；

(5)将形成体胚的胚小叶外植体转移到添加4mg/LBAP的体胚萌发和再生培养基上进行培养，诱导体胚萌发成再生苗，每4周继代培养一次；

(6)采用SSR方法筛选基因型发生突变的再生苗为花生突变体，淘汰基因型未突变的再生苗；

(7)将花生突变体无菌嫁接到砧木上，经炼苗后种植于大田，收获种子；

(8)将收获的种子连续自交至M₅代，通过生育期间及收获后性状观察和/或种子营养成分测定，选择各种变异的花生突变体。

8.根据权利要求7所述花生快速育种方法，其特征在于：所述的表面消毒处理为：将种胚置于75％的酒精浸泡20s，再用0.1％的升汞浸泡10min，最后用无菌水漂洗5次。

9.根据权利要求7或8所述花生快速育种方法，其特征在于：

所述体胚诱导培养基为MS+10mg/L 2,4-D+30g/L蔗糖+8g/L琼脂，pH调至5.8；

所述体胚萌发和再生培养基为MS+4mg/LBAP+30g/L蔗糖+8g/L琼脂，pH调至5.8。

10.根据权利要求9所述花生快速育种方法，其特征在于：

所述体胚诱导培养、体胚萌发和再生培养的培养条件为：温度为25～26℃、光照强度为2000～3000Lx、每日光照为12～15h。