[发明专利]甲胎蛋白双极电极纸芯片电致化学发光传感器的构建

权利要求书

1.一种甲胎蛋白双极电极纸芯片电致化学发光传感器的构建，其特征在于，制备步骤为：

（1）在计算机上利用Adobe illustrator软件设计双极电极纸芯片的亲疏水蜡打印图案，如附图1所示；

（2）将步骤（1）中设计的打印图案通过蜡打印机打印在色谱纸上，随后将打印过的A4色谱纸放置到平板加热器或烘箱中，在100 ºC下加热100 s，使蜡融化并浸透整个纸的厚度，形成疏水墙；

（3）将步骤（2）中获得的纸芯片的通过丝网印刷技术印刷导电碳浆，制备驱动电极；

（4）将步骤（3）中获得的纸芯片双极电极区域生长金纳米颗粒，制备双极电极纸芯片；

（5）将步骤（4）中制得的纸芯片双极电极阴极区域滴加10~20 μL 10 μg/mL的甲胎蛋白捕获抗体溶液，室温孵育20~30分钟，用超纯水清洗三次；

（6）将步骤（5）中得到的纸芯片双极电极阴极区域滴加10~20 μL 100 μg/mL牛血清白蛋白溶液，室温孵育20~30分钟，用超纯水清洗三次；

（7）将步骤（6）中得到的纸芯片双极电极阴极区域滴加10 μL 10 pg/mL ~ 200 ng/mL的一定量甲胎蛋白标准溶液，室温孵育20~30分钟，用超纯水清洗三次；

（8）将10 μL 5~10 mg/mL的Ab2/PdAu二抗复合物溶液滴加至步骤（7）中获得的双极电极阴极区域，室温孵育20~30分钟，用超纯水清洗三次，制得甲胎蛋白双极电极纸芯片电致化学发光传感器；

（9）将步骤（8）中得到的纸芯片双极电极阳极区域信号池内加入50 μL 0.1 mol/L的磷酸缓冲溶液含有2.0~5.0 mmol/L 三联吡啶钌Ru(bpy)₃²⁺和30~50 mmol/L 三丙胺TPA，纸芯片双极电极阴极区域反应池内滴加50 μL 30~50 mmol/L的H₂O₂溶液，在驱动电极间施加4.0~6.0 V电压，测定信号池电致化学发光强度。

2.本发明所述步骤（1）中设计的纸芯片的尺寸如附图1所示，纸芯片双极电极4×14mm，双极电极两侧信号池和反应池为10×10 mm的正方形。

3.本发明所述步骤（4）中双极电极区域生长金纳米颗粒的步骤为：量取160 mL的二次水置于三口烧瓶中，加热到90 ºC， 随后加入1.6 mL 氯金酸，水浴加热到96 ºC，反应1min，立即加入5.6 mL 1%柠檬酸钠，并搅拌15 min至溶液变为酒红色；得到金种子溶液；10μL金种子溶液滴至纸芯片双极电极区域，孵育1h，加入20μL含有1.2mmol/L氯金酸、2.0mmol/L十六烷基三甲基氯化铵和7.2 mmol/L过氧化氢的10 mmol/L磷酸缓冲溶液，孵育8分钟，制得双极电极区域生长金纳米颗粒。

4.本发明所述步骤（8）中Ab2/PdAu二抗复合物的制备步骤为： 50 μL 1.0 mmol/L的乙酸铜水溶液，2.5 mL 0.1 mol/L的十八烷基三甲基氯化铵的乙二醇溶液，1.0 mL 1.0mmol/L的氯钯酸盐酸溶液，将上述溶液依次加入到1.0 mL 1.0 mmol/L的氯金酸溶液中，搅拌10分钟，然后，迅速加入0.10 mL 0.2 mol/L新制备的抗坏血酸溶液，轻轻摇动该溶液10分钟；所得混合溶液置于15 ℃恒温箱中反应12小时；反应结束后，得到的产物经离心分离，用超纯水洗涤5次后，放入干燥箱中在60 ℃干燥12 h，得到PdAu纳米材料，将PdAu纳米材料与甲胎蛋白二抗Ab2混合，室温孵育30分钟，得到Ab2/PdAu复合物。