[发明专利]一种高通量可视化快速检测立克次体的芯片及应用

权利要求书

1.一种高通量可视化检测立克次体的芯片，其特征在于，所述芯片的载体为正电尼龙膜；正电尼龙膜载体上探针的点样量为0.3μL；

所述探针为4条属特异性探针，如SEQ ID NO.9-12所示；和10条种特异性探针序列，如SEQ ID NO.17-26所示；

与所述探针配合使用的引物为：立克次体属上游引物序列如SEQ ID No.1所示，下游引物序列如SEQ ID No.2所示；

埃里克体属上游引物序列如SEQ ID No.3所示，下游引物序列如SEQ ID No.4所示；

贝氏柯克斯体属上游引物序列如SEQ ID No.5所示，下游引物序列如SEQ ID No.6所示；

恙虫属上游引物序列如SEQ ID No.7所示，下游引物序列如SEQ ID No.8所示。

2.一种高通量可视化检测立克次体的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的芯片。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，每对引物的下游引物的5’端标记生物素；10条种特异性探针和4条属特异性探针的3’端均连接20个多聚碱基T，5’端均不修饰。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述芯片上还包括：

10种立克次体的阳性质粒标准品：分别为含有普氏立克次体、莫氏立克次体、康氏立克次体、黑龙江立克次体、立氏立克次体、西伯利亚立克次体、查菲埃立克体、犬埃立克体、恙虫病东方体和贝氏柯克斯体标准菌株的16S rRNA基因的重组质粒；1条阳性质控探针，如SEQ ID NO.13所示；

1条阳性质控互补寡聚核苷酸链，如SEQ ID NO.14所示；

1条阴性质控探针，如SEQ ID NO.15所示；

1条显色质控探针，如SEQ ID NO.16所示。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述显色质控探针的3’端标记20个多聚碱基T作为连接端的摆动臂，并在其5’端标记生物素；所述阳性质控探针，阳性质控互补寡聚核苷酸链，和阴性质控探针的3’端均连接20个多聚碱基T，5’端均不修饰。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述芯片的制备方法为：将探针用去离子水稀释成100μM作为储存液，用点样液稀释探针至终浓度为8μM，分装于点样仪中，采用喷射点样的方式将探针点制在正电尼龙膜载体上，点样完成后将芯片置于紫外线下交联15分钟。

7.根据权利要求2-6任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR反应试剂和TMB显色液。