[发明专利]一种大肠杆菌高效表达质粒DNA的培养方法

权利要求书

1.一种大肠杆菌高效表达质粒DNA的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）培养基的配制：

a. 称取相应重量份的牛肉膏2.5~3.5份、蛋白胨10.5~11.5份、氯化钠2.2~2.8份、改性碳酸镧3.2~3.8份、活性炭1.2~1.8份、酒石酸0.32~0.38份、柠檬酸0.12~0.18份、甘油12.5~13.5份、去离子水820~880份备用；

b. 将操作a中称取的牛肉膏、蛋白胨、氯化、改性碳酸镧、活性炭、酒石酸、柠檬酸、甘油、去离子水共同投入搅拌罐内，将搅拌罐内的温度控制为97~99℃，持续搅拌32~38min，在搅拌的同时进行射线辐照处理；

c. 等到操作b中所得溶液内的温度降至42~48℃时，用1.2~1.8mol/L的盐酸溶液或1.2~1.8mol/L的氢氧化钠溶液将操作b中所得的溶液的pH调至7.4~7.6；

（2）接种：

取100~120μL氨苄青霉素投入200~300mL步骤（1）所配制的培养基中，然后取100~120μL大肠杆菌DH5α菌株接种到添加有氨苄青霉素的培养基中，再称取特制的复合粉投入含有菌株和氨苄青霉素的培养基中；

（3）菌体培养：

将步骤（2）中的培养基置于恒温摇床上进行菌株培养，在培养的同时进行声光波交替联合处理，摇菌培养直到菌液的OD600达到0.9~1即可。

2.根据权利要求1所述一种大肠杆菌高效表达质粒DNA的培养方法，其特征在于，所述步骤（1）操作a或操作b中改性碳酸镧的制备方法包括如下步骤：

1）将碳酸镧投入质量分数为2.5~3.5%的盐酸溶液中进行浸泡，浸泡时保持盐酸溶液中的温度为62~68℃，浸泡处理10.5~11.5min后滤出备用；

2）将步骤1）中酸液浸泡处理后的碳酸镧投入质量分数为4.2~4.8%的氢氧化钠溶液中进行浸泡，浸泡时保持氢氧化钠溶液中的温度为92~98℃，浸泡处理17~19min后滤出备用；

3）将步骤2）中氢氧化钠浸泡处理后的碳酸镧和改性液按照质量体积比为1g:32~38mL共同投入反应釜中，将反应釜中的压力控制为0.42~0.48MPa，反应釜内的温度控制为220~280℃，处理21~23min后过滤得滤渣；

4）将步骤3）中所得的滤渣投入烘箱内进行干燥，烘箱内的温度控制为72~78℃，干燥至含水率为3~4%即可。

3.根据权利要求2所述一种大肠杆菌高效表达质粒DNA的培养方法，其特征在于，所述步骤3）中改性液中各成分及对应重量份为：甘油21~25份、辛基酚聚氧乙烯醚3.5~4.5份、十四烷基三甲基溴化铵12.5~13.5份、十六烷基磺酸钠13.5~14.5份、去离子水420~480份。

4.根据权利要求1所述一种大肠杆菌高效表达质粒DNA的培养方法，其特征在于，所述步骤（1）操作b中射线辐照的形式为β射线，辐照的剂量为2.2~2.8Gy/min。

5.根据权利要求1所述一种大肠杆菌高效表达质粒DNA的培养方法，其特征在于，所述步骤（2）中氨苄青霉素的浓度为16~20μL/mL。

6.根据权利要求1所述一种大肠杆菌高效表达质粒DNA的培养方法，其特征在于，所述步骤（2）中特制的复合粉的制备方法是：将苹果酸和碳酸氢钠按照重量比为1:2~2.4混匀后，置于紫外灯下进行灭菌处理，灭菌处理的时间为30~40min。

7.根据权利要求1所述一种大肠杆菌高效表达质粒DNA的培养方法，其特征在于，所述步骤（3）中菌株培养时保持恒温培养箱内的温度为35~37℃，摇床的转速为200~220rpm。

8.根据权利要求1所述一种大肠杆菌高效表达质粒DNA的培养方法，其特征在于，所述步骤（3）中声光波交替联合处理的程序为：首先用频率为20~24kHz的超声波处理14~18min，然后用波长为430~440nm的光波处理8~12min，再用频率为20~24kHz的超声波和波长为430~440nm的光波联合处理5~7min。