[发明专利]鉴定混合肉样中猪肉成分比例的方法及试剂盒在审
| 申请号： | 201811175633.0 | 申请日： | 2018-10-10 |
| 公开（公告）号： | CN109251984A | 公开（公告）日： | 2019-01-22 |
| 发明（设计）人： | 邵建宏;罗宝正;廖秀云;赵福振;薄清如;冯家望;姚丽锋;王珊;丁琦 | 申请（专利权）人： | 珠海出入境检验检疫局检验检疫技术中心 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 王国标 |
| 地址： | 519000 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 试剂盒 双重荧光PCR 同源 猪肉 混合样品 技术参考 鉴定结果 浓度差异 系统建立 相对误差 真实反应 低成本 种鉴定 畜禽 猪源 灵敏 检测 监管 保证 | ||
1.一种鉴定混合肉样中猪肉成分比例的方法，其特征在于，通过基于同源加尾系统的双重荧光PCR同时检测畜禽基因组中普遍存在的管家基因Myostatin Precursor MSTNmRNA基因序列和家猪基因组Sus scrofabeta actin基因序列。
2.一种鉴定混合肉样中猪肉成分比例的试剂盒，其特征在于，试剂盒内的反应体系包括序列如SEQ ID №：1至SEQ ID №：6所示的引物和探针，其中序列SEQ ID №：1和SEQ ID№：2分别为检测畜禽源性成分的引物My75TF和引物My75TR，序列SEQ ID №：3为检测畜禽源性成分的荧光探针My75P，序列SEQ ID №：4和SEQ ID №：5分别为检测猪源性成分的引物Sus91TF和引物Sus91TR，序列SEQ ID №：6为检测猪源性成分的荧光探针Sus91P，还包括如序列表SEQ ID №：7所述的同源加尾TagP20。
3.根据权利要求2所述的鉴定混合肉样中猪肉成分比例的试剂盒，其特征在于，所述荧光探针My75P的5’端标记报告荧光基团Cy5，3’端标记淬灭荧光基团BHQ3。
4.根据权利要求2所述的鉴定混合肉样中猪肉成分比例的试剂盒，其特征在于，所述荧光探针Sus91P的5’端标记报告荧光基团FAM，3’端标记淬灭荧光基团BHQ1。
5.根据权利要求2～4任一项所述的鉴定混合肉样中猪肉成分比例的试剂盒，其特征在于，所述反应体系还包括DNA模板和DEPC水。
6.根据权利要求5所述的鉴定混合肉样中猪肉成分比例的试剂盒，其特征在于，反应体系共12.5μL，包括：浓度分别为2μmol/L、2μmol/L、10μmol/L的引物My75TF、引物My75TR、荧光探针My75P各1μL，浓度分别为2μmol/L、2μmol/L、6μmol/L的引物Sus91TF、引物Sus91TR、荧光探针Sus91P，浓度为20μmol/L的同源加尾TagP201μL，DNA模版3μL，DEPC水2.5μL。
7.根据权利要求6所述的鉴定混合肉样中猪肉成分比例的试剂盒，其特征在于，所述反应体系的参数为：95℃3min；95℃15s，56℃45s，40个循环。
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