[发明专利]从血清中提取载脂蛋白B的方法及载脂蛋白B有效
| 申请号： | 201811177128.X | 申请日： | 2018-10-09 |
| 公开（公告）号： | CN109053877B | 公开（公告）日： | 2021-04-13 |
| 发明（设计）人： | 柯拓 | 申请（专利权）人： | 广东菲鹏生物有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/775 | 分类号： | C07K14/775;C07K1/20 |
| 代理公司： | 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙) 11371 | 代理人： | 李青 |
| 地址： | 523000 广东省东莞市松山*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 血清 提取 脂蛋白 方法 | ||
1.一种从血清中提取载脂蛋白B的方法，其特征在于，所述方法包括将血清预处理后得到的载脂蛋白B粗样品经疏水层析，洗脱得到所述载脂蛋白B；
所述预处理包括将血清经高分子化合物和二价金属离子处理；
所述高分子化合物包括硫酸葡聚糖、聚乙二醇或聚乙烯吡咯烷酮中的一种或多种；
所述高分子化合物的用量为0.01％-0.2％(W/V)；
所述二价金属离子包括硫酸锰、氯化钙或氯化锰中的一种或多种；
所述二价金属离子的浓度为0.1-1M。
2.根据权利要求1所述的从血清中提取载脂蛋白B的方法，其特征在于，所述预处理还包括将血清经高分子化合物和二价金属离子处理后透析，得到载脂蛋白B粗样品。
3.根据权利要求1所述的从血清中提取载脂蛋白B的方法，其特征在于，所述高分子化合物的用量为0.05％-0.15％(W/V)。
4.根据权利要求1所述的从血清中提取载脂蛋白B的方法，其特征在于，所述二价金属离子的浓度为0.3-0.7M。
5.根据权利要求1所述的从血清中提取载脂蛋白B的方法，其特征在于，将低密度脂蛋白在高盐缓冲液中进行透析，并经还原剂处理后，固液分离得到所述载脂蛋白B粗样品。
6.根据权利要求5所述的从血清中提取载脂蛋白B的方法，其特征在于，所述高盐缓冲液中无机盐的浓度为0.5-2M。
7.根据权利要求6所述的从血清中提取载脂蛋白B的方法，其特征在于，所述高盐缓冲液中无机盐的浓度为0.8-1.8M。
8.根据权利要求5所述的从血清中提取载脂蛋白B的方法，其特征在于，所述高盐缓冲液中无机盐包括氯化钠、硫酸铵或硫酸钠中的一种或多种。
9.根据权利要求5所述的从血清中提取载脂蛋白B的方法，其特征在于，所述还原剂包括二硫苏糖醇、巯基乙醇、β-巯基乙醇或三(2-羧乙基)膦中的一种或多种。
10.根据权利要求5所述的从血清中提取载脂蛋白B的方法，其特征在于，采用离心的方式进行固液分离。
11.根据权利要求10所述的从血清中提取载脂蛋白B的方法，其特征在于，离心后取上清得到所述载脂蛋白B粗样品。
12.根据权利要求10所述的从血清中提取载脂蛋白B的方法，其特征在于，所述离心的转速为10000-14000rpm，温度为0-8℃。
13.根据权利要求1所述的从血清中提取载脂蛋白B的方法，其特征在于，所述疏水层析使用的结合缓冲液含有0.5-2M的无机盐。
14.根据权利要求13所述的从血清中提取载脂蛋白B的方法，其特征在于，所述疏水层析使用的结合缓冲液含有0.8-1.8M的无机盐。
15.根据权利要求13所述的从血清中提取载脂蛋白B的方法，其特征在于，所述无机盐包括氯化钠、硫酸铵或硫酸钠中的一种或多种。
16.根据权利要求1所述的从血清中提取载脂蛋白B的方法，其特征在于，所述疏水层析使用的洗脱液为tris缓冲液。
17.根据权利要求1所述的从血清中提取载脂蛋白B的方法，其特征在于，所述疏水层析使用的层析柱的填料选自Butyl Beads 4FF填料、Octyl填料或Phenyl填料。
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