[发明专利]筛选具有耐高温特性的中间球海胆用引物及方法

说明书

本发明公开了一种筛选具有耐高温特性的中间球海胆用引物，由1~6号引物对构成，上游引物F1~F6及下游引物R1~R6的DNA序列分别如SEQ ID NO：1~SEQ ID NO：12所示，筛选方法依次按照如下步骤进行：提取中间球海胆RNA；将中间球海胆RNA反转录合成cDNA；以所得到的cDNA为模板，分别以1~6号引物对进行定量PCR反应；选出定量PCR反应的扩增产物同时满足下列相对表达值的中间球海胆为具有耐高温特性的中间球海胆：1号~6号引物对扩增产物相对表达值7.57~8.34、8.41~10.04、28.50~31.82、5.13~6.00、0.20~0.23及0.32~0.38。

技术领域

本发明属于生物技术，尤其涉及一种筛选具有耐高温特性的中间球海胆用引物及方法。

背景技术

中间球海胆（Strongylocentrotus intermedius）原产于日本北海道和俄罗斯远东等地沿海，1989年自日本引入我国，现已在大连、山东等地形成一定的人工养殖规模，是我国北方沿海最主要的经济海胆种类，其性腺的国内市场需求量和出口量逐年递增。大量研究表明，海水温度是影响中间球海胆生长和性腺发育的主要因素，中间球海胆在15~18℃左右摄食最为活跃，当水温超过23℃时，则会引起死亡。近年来，中国北黄海夏季海水温度经常出现长时间在25℃以上的情况，导致了养殖中间球海胆的大规模死亡，严重影响了中间球海胆产业的健康发展。但是，迄今为止并没有关于活体筛选具有耐高温特性的中间球海胆的相关报道。

发明内容

本发明是为了解决现有技术所存在的上述技术问题，提供一种筛选具有耐高温特性的中间球海胆用引物及方法。

本发明的技术解决方案是：一种筛选具有耐高温特性的中间球海胆用引物，其特征在于由1~6号引物对构成，所述1~6号引物对上游引物 F1~F6及下游引物R1~R6的DNA序列分别如下：

1号 F1：5'- cagaagaccctgtggtgaagttg-3'；

R1：5'- aagaggtagctgatgaggattgg-3'；

2号F2：5'- gatggcagcgtctatctttcagt-3'；

R2：5'- ccaaccagtatttccagaacacg-3'；

3号F3：5'- tggtcttgcccctccctcacttg-3'；

R3：5'- tccctaagattacttccttcggt-3'；

4号F4：5'- ttctaaaacgcatcggatacgct-3'；

R4：5'- agtccagtcccacatcattcaag-3'；

5号F5：5'- tgtttacatcagcatctcagcgtc-3'；

R5：5'- cccttctttcccacatccttcaa-3'；

6号F6：5'- atgaagatgctgatgttgtttgc-3'；

R6：5'- aggacctccagtgttgagtgttt-3'。

一种用上述引物筛选具有耐高温特性的中间球海胆的方法，依次按照如下步骤进行：

a.提取中间球海胆RNA；

b.将中间球海胆RNA反转录合成cDNA；

c.以所得到的cDNA为模板，分别以1~6号引物对进行定量PCR反应；

d.选出定量PCR反应的扩增产物同时满足下列相对表达值的中间球海胆为具有耐高温特性的中间球海胆：