[发明专利]一种测定黑加仑二次萌发芽内呼吸速率的方法

权利要求书

1.一种测定黑加仑二次萌发芽内呼吸速率的方法，其特征在于通过测定溶液中氧的浓度的下降程度来确定芽内呼吸速率的方法，包括以下步骤：

(1)选取黑加仑二次萌发后的一年生枝条，剥离处理后的枝条的上部芽，除去鳞片，纵向切成两个半芽，电子天平称一定质量大小基本一致的样品；

(2)去除运动芽中的任何空气，将每个样品置于具有一定体积缓冲液的注射器中；将注射器倒置，使得注射器中的空气可以被清除；注射器的开口端用手指阻塞，然后旋转回来，柱塞在顶部；多次拉动柱塞抽气直到切除的芽沉入注射器的底部，以此保证芽运动中的任何空气空间都被缓冲液替代；

(3)将切除的芽放置在氧热电极控制单元的反应室中；将一定体积的缓冲液吸入反应室，然后进行氧电极反应试验；

(4)将螺帽盖放置在反应室上，测量程序开始运行；当反应曲线稳定时，读数代表总呼吸速率；然后将反应室中的磁力搅拌棒暂停，从而可将呼吸抑制剂分别加入到反应室中；测量重复三次，计算特定途径呼吸速率。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述的样品质量为0.03-0.05g。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述的缓冲液为磷酸盐缓冲盐水(PBS)，体积4-6mL，ph6.7-6.9。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述的实验条件是试验温度为25℃，反应介质为2.0mL，pH6.7-6.9的PBS缓冲液。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)所述的呼吸抑制剂为10mmol L^-1NaF(抑制EMP)，50mmol L^-1丙二酸(抑制TCA途径)和10mmol L^-1Na₃PO₄(抑制PPP)；计算公式为：特定途径的呼吸速率(抑制性呼吸)＝总呼吸速率-余留呼吸速率；每个呼吸途径呼吸总量的比例(％)＝(呼吸途径/总呼吸)×100，呼吸速率为单位为lmol O2g^-1FW h^-1。