[发明专利]一种预测混合氮源下组培苗同化铵盐份额及培养基中铵盐最适浓度的方法

权利要求书

1.一种预测混合氮源下组培苗同化铵盐份额及培养基中铵盐最适浓度的方法，其特征在于：包含以下步骤：

第一，将待测组培苗通过调节培养基的激素比例使其处于增殖阶段，形成无根的组培苗；

第二，通过测定用于配置植物组织培养的培养基中的硝酸盐的稳定氮同位素比值，筛选出稳定氮同位素值差值大于10‰的两种硝酸盐，其稳定氮同位素值分别为δ¹⁵N₀₁和δ¹⁵N₀₂；分别将这两种硝酸盐作为唯一氮源配置为待考察的硝酸盐浓度的培养基；

第三，取带有1个单芽的待测组培苗分别培养在上述稳定氮同位素值不同的两种硝酸盐作为唯一氮源的培养基中；

第四，组培苗经过5周培养后，分别测定上述两种硝酸盐作为唯一氮源的培养基培养下的组培苗叶片的稳定氮同位素值，其叶片稳定氮同位素值分别记为δ¹⁵N_N1和δ¹⁵N_N2；

第五，通过测定用于配置植物组织培养的培养基中的铵盐的稳定氮同位素比值δ¹⁵N_A，选出其稳定氮同位素比值δ¹⁵N_A与δ¹⁵N₀₁和δ¹⁵N₀₂均大于10‰的铵盐；

第六，将稳定氮同位素值为δ¹⁵N₀₁和δ¹⁵N₀₂的硝酸盐分别与上述铵盐配置成待考察的硝酸盐浓度下、不同铵盐浓度的两组混合氮源培养基；

第七，同样，将带有1个单芽的待测组培苗，分别同时培养在上述两组混合氮源培养基上；

第八，同样，待组培苗培养5周后，测定在上述两组混合氮源培养基上培养的组培苗不同铵盐浓度下叶片稳定氮同位素值，铵盐与稳定氮同位素值为δ¹⁵N₀₁的硝酸盐组成的混合氮源培养基培养的组培苗叶片稳定氮同位素值记为δ¹⁵N_N1mix，铵盐与稳定氮同位素值为δ¹⁵N₀₂的硝酸盐组成的混合氮源培养基培养下的组培苗叶片稳定氮同位素值记为δ¹⁵N_N2mix；

第九，利用δ¹⁵N_N1、δ¹⁵N_N2以及同一铵盐浓度下的δ¹⁵N_N1mix和δ¹⁵N_N2mix，分别计算待考察的硝酸盐浓度下不同铵盐浓度的组培苗利用硝酸盐份额f_b；

第十，依据待测硝酸盐浓度下不同铵盐浓度下组培苗利用硝酸盐的份额f_b；计算待测硝酸盐浓度下不同铵盐浓度的组培苗铵盐利用份额f_a；

第十一，以酶动力学的米氏方程建立不同铵盐浓度的组培苗铵盐利用份额f_a随铵盐浓度变化的关系模型；这里的米氏方程的表达式为：这里的f_a为不同铵盐浓度的组培苗铵盐利用份额，c_a为培养基中铵盐浓度，f_max和K_f值为米氏方程的常数；

第十二，依据上述模型的f_max和K_f值，并将被考察的培养基中的铵盐浓度值作为c_a代入求出被考察的培养基中组培苗同化铵盐份额；

第十三，依据上述模型的f_max和K_f值，并将f_a＝0.741代入求出培养基中的铵盐浓度值c_a，此时的c_a即为待测混合氮源下组培苗培养基中铵盐最适浓度；在第九步骤中，计算在待考察的硝酸盐浓度下某一特定铵盐浓度的培苗利用硝酸盐的份额f_b的方法为：将δ¹⁵N_N1、δ¹⁵N_N2以及该铵盐浓度下的δ¹⁵N_N1mix和δ¹⁵N_N2mix代入方程：在第十步骤中，计算待考察硝酸盐浓度下某一特定铵盐浓度的组培苗铵盐利用份额f_a的公式是：f_a＝1-f_b；在第十一步骤中，将不同铵盐浓度c_a与对应的铵盐浓度下的组培苗铵盐利用份额f_a的数据，用米氏方程来拟合，获取待考察硝酸盐浓度下待测组培苗的米氏方程的常数f_max和K_f值；在第十三步骤中，将f_a＝0.741代入得到公式计算得出c_a即为待测混合氮源下组培苗培养基中铵盐最适浓度。