[发明专利]一种雪旺细胞与神经干细胞联合LC-PLGA导管及其应用

权利要求书

1.一种雪旺细胞与神经干细胞联合Laminin-chitosan-PLGA导管，其特征在于，所述雪旺细胞与神经干细胞联合Laminin-chitosan-PLGA导管的制备方法具体如下：

(1)制备Laminin-chitosan-PLGA导管：首先将PLGA导管浸渍于浓度为0.1％的壳聚糖溶液中，30min后将其取出并刷去导管表面的壳聚糖，然后做晾干及干燥处理，15min后将PLGA导管内的芯轴抽出得到chitosan-PLGA导管；最后将制备好的chitosan-PLGA导管浸泡在浓度为0.2mg/ml的层粘连蛋白水溶液中，20min后将其取出水洗，并在chitosan-PLGA导管表面进行重复层粘连蛋白膜的处理得到Laminin-chitosan-PLGA导管，将得到的Laminin-chitosan-PLGA导管剪切成长度为7mm的导管，备用；

(2)神经干细胞的获取及培养：首先将SPF级别孕14-16天SD大鼠脱臼处死，使用75％酒精喷洒躯干消毒，腹部切口，将子宫拉出并结扎子宫动脉后，于子宫颈处剪断，将子宫置于盛有D-Hanks液的培养皿中，同时用PBS对其进行冲洗，然后将子宫剪开并取出胚胎，同时使用显微镊离断胎头；在解剖显微镜下将大脑半球分离，并剥除血管膜，分离出海马组织，将分离出的海马组织转移至预先铺有DMEM/F12的培养皿中，使用巴斯德吸管轻柔吹打，将细胞悬液离心处理，最后将得到的细胞沉淀使用神经干细胞完全培养基重悬并计数，将细胞以1×10⁶个/ml的密度种植于T25培养瓶中，并置于37℃，5％CO₂的培养箱中，每两天换一次液，每七天传代一次；

(3)雪旺细胞的获取及培养：首先将3-5天新生SD大鼠颈椎脱臼处死，之后用75％酒精消毒，在无菌条件下取出坐骨神经，使用D-Hanks液洗去血细胞，解剖显微镜下除去外膜及结缔组织，并将神经剪碎，将减碎的神经片段与0.2％NB4的体积：Dispase的体积＝3:1的溶液混合，然后进行振荡、离心，弃上清并重悬，最后将细胞种于细胞培养皿，每隔一天换液并传代；

(4)连接神经干细胞、雪旺细胞和Laminin-chitosan-PLGA导管：首先将神经断端的近心端套入Laminin-chitosan-PLGA导管，神经断端近心端的套入长度为1mm，再将神经断端外膜与Laminin-chitosan-PLGA导管以10-0缝合线缝合；然后将matrigel、雪旺细胞和神经干细胞的混合物注入Laminin-chitosan-PLGA导管内；最后将神经断端的远心端以同近心端的处理方式进行处理。

2.根据权利要求1所述雪旺细胞与神经干细胞联合Laminin-chitosan-PLGA导管，其特征在于，所述Laminin-chitosan-PLGA导管内神经断端间距为5mm。

3.根据权利要求1所述雪旺细胞与神经干细胞联合Laminin-chitosan-PLGA导管，其特征在于，所述步骤(1)中壳聚糖溶液的浓度为0.1％，所述壳聚糖溶液的成分及各组分的质量百分比为：壳聚糖为3.5％，醋酸为4％，水为92.5％；所述步骤(1)中在chitosan-PLGA导管表面进行层粘连蛋白膜处理时是在冰浴的条件下进行。