[发明专利]一种高活性葡萄糖氧化酶的固定方法

权利要求书

1.一种高活性葡萄糖氧化酶的固定方法，其特征在于：将葡萄糖氧化酶加入到含有硅烷偶联剂的水溶性光敏树脂单体溶液中，通过光聚合将酶包埋在固化后光敏树脂的网状结构中；所述水溶性光敏树脂单体溶液中的硅烷偶联剂为乙烯基三乙氧基硅烷、乙烯基三甲氧基硅烷或乙烯基三（β-甲氧乙氧基）硅烷；

上述固定方法，具体包括如下步骤：

步骤1，配制含硅烷偶联剂的水溶性光敏树脂单体溶液，然后往溶液中加入所需量的光引发剂和交联剂，得到混合溶液；所述水溶性光敏树脂单体溶液中含有至少两种光敏树脂单体，其中，光敏树脂单体为甲基丙烯酸羟乙酯、N-乙烯基吡咯烷酮、甲基丙烯酸羟丙酯或2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酰胆碱；

步骤2，将葡萄糖氧化酶加入混合溶液中，制得含酶光敏树脂单体溶液；

步骤3，将含酶光敏树脂单体溶液滴涂到电极表面，在紫外灯下固化一段时间；

步骤4，将紫外灯下固化后的电极利用水化去除电极表面未反应的单体或低聚体，得到表面固化有葡萄糖氧化酶的电极。

2.根据权利要求1所述的高活性葡萄糖氧化酶的固定方法，其特征在于：步骤1中，所述光引发剂为2-羟基-2-甲基-1-苯基-1-丙酮；所述交联剂为二甲基丙烯酸乙二醇酯。

3.根据权利要求1所述的高活性葡萄糖氧化酶的固定方法，其特征在于：所述光引发剂2-羟基-2-甲基-1-苯基-1-丙酮的添加量为0.3~0.5%；所述交联剂二甲基丙烯酸乙二醇酯的添加量为0.3~0.4%。

4.根据权利要求1所述的高活性葡萄糖氧化酶的固定方法，其特征在于：步骤2中，葡萄糖氧化酶与混合溶液的质量体积比：每加入1mg葡萄糖氧化酶，所需10µL混合溶液。

5.根据权利要求1所述的高活性葡萄糖氧化酶的固定方法，其特征在于：步骤3中，固化用紫外灯的波长为250~398nm，强度为20~30mW/cm²，固化时间为50~60min。

6.根据权利要求1所述的高活性葡萄糖氧化酶的固定方法，其特征在于：步骤4中，将固化后的电极于常温下浸泡于水、生理盐水或PBS缓冲溶液中，除去电极表面残余未反应或聚合度低的单体，浸泡时间为20~30min。