[发明专利]猪支原体肺炎和猪圆环病毒2型重组蛋白及制备二联疫苗

说明书

本发明涉及疫苗技术领域，尤其是涉及一种猪支原体肺炎和猪圆环病毒2型重组蛋白及其制备的二联基因工程疫苗和应用。一种猪支原体肺炎和猪圆环病毒2型二联基因工程疫苗，其特征在于，所述疫苗包含Mhp P97R1‑P46‑P42重组蛋白和PCV2 Cap重组蛋白。所述Mhp P97R1‑P46‑P42重组蛋白的编码基因序列如SEQ ID NO.1所示；所述PCV2 Cap重组蛋白的编码基因序列如SEQ ID NO.2所示。上述二联基因工程疫苗能有效防控猪支原体肺炎和猪圆环病毒2型，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及疫苗技术领域，尤其是涉及一种猪支原体肺炎和猪圆环病毒2型重组蛋白及其制备的二联基因工程疫苗和应用。

背景技术

猪支原体肺炎(Mycoplasmal pneumoniae of swine，MPS)是由于感染猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumonia，Mhp)而引发的慢性呼吸道传染病，又称“猪气喘病”或“猪地方性肺炎(porcine enzootic pneumonia，PEP)”。仔猪感染偏多，临床上以哮喘、阵发性痉挛性咳嗽、食欲减退和肺部水肿为主要特征，最终导致窒息死亡。该病具有感染率高、传染性高的特点。猪肺炎支原体常会与多杀性巴氏杆菌(P. multocida)、猪繁殖呼吸综合症病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus，PRRSV)和猪圆环病毒(Porcinecircovirus，PCV)等病原体协同感染，增加了相关疾病的严重性和潜在的持久性，使呼吸道疾病加重，继而引起呼吸系统疾病综合症 (Porcine Respiratory DiseaseComplex，PRDC)，最终导致死亡率上升，给世界养猪业带来巨大的经济损失。大量的研究表明，在猪肺炎支原体感染过程中，细胞膜上黏附因子抗原引发的免疫效应起关键性的作用。Mhp与猪呼吸道上皮细胞纤毛的特异性黏附是引起猪支原体肺炎的关键。而此黏附过程中是多种黏附因子共同作用的结果，现已发现的P97、P46和P42是三种起主要黏附功能的膜蛋白。

猪圆环病毒2型感染是由猪圆环病毒2型（PCV2）所引起的一系列疾病的总称。PCV2感染后猪群免疫功能下降，且可并发或继发细菌或病毒感染。PCV2可以引起断奶仔猪发生衰竭及死亡。PCV2基因组为环状、单链DNA，全长1767-1768 bp，含有11个ORFs，分别命名为ORF1-ORF11。研究表明，ORF2编码病毒的核衣壳蛋白（Cap）是其主要的免疫原，能诱导中和抗体的产生，对猪圆环病毒的诊断和疫苗研究有较大的意义，同时也是研制基因工程亚单位疫苗的理想靶抗原。

本研究通过原核表达Mhp的P97R1、P46和P42的嵌合蛋白，以及PCV2的Cap蛋白，蛋白纯化后1:1混合免疫BALB/c小鼠，经体液免疫和细胞免疫相关实验检测证实效果免疫效果显著。此混合蛋白可以作为控制Mhp和PCV2的二联基因工程疫苗使用。

发明内容

本发明的上述目的通过以下技术方案来实现：

一种Mhp P97R1-P46-P42重组蛋白，其特征在于，其编码基因序列与SEQ ID NO.1具有大于90%的同一性，或大于92%的同一性，或大于95%的同一性，或大于96%的同一性，或大于97%的同一性，或大于98%的同一性，或大于99%的同一性；优选如SEQ ID NO.1所示。

一种PCV2 Cap重组蛋白，其特征在于，其编码基因序列与SEQ ID NO.2具有大于90%的同一性，或大于92%的同一性，或大于95%的同一性，或大于96%的同一性，或大于97%的同一性，或大于98%的同一性，或大于99%的同一性；优选如SEQ ID NO.2所示。

一种重组载体，其特征在于，含有上述Mhp P97R1-P46-P42重组蛋白的编码基因；优选是pET32a-P97R1-P46-P42。