[发明专利]一种利用CDDP标记构建重楼属植物指纹图谱的方法

说明书

本发明属于分子生物学技术领域，给出一种利用CDDP标记构建重楼属植物指纹图谱的方法，其包括重楼属植物基因组DNA的提取与检测；CDDP多态性引物的筛选；利用筛选的CDDP多态性引物对重楼属植物进行PCR扩增与电泳检测；选取核心引物构建重楼属植物的CDDP指纹图谱。本发明可用于重楼属种质资源鉴定、遗传多样性分析，与常规的形态鉴定相比，利用本发明方法可以快速的进行重楼属植物的鉴定，不受发育阶段的影响，对于重楼属的鉴定具有参考价值。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，涉及重楼属植物品种鉴别方法，具体涉及一种利用CDDP标记构建重楼属植物指纹图谱的方法，以及所述方法在重楼属种质资源鉴定、遗传多样性分析中的应用。

背景技术

重楼是我国一味传统的民族药，《神农本草经》中以“蚤休”之名载入，重楼作为其正式药名始于《滇南本草》的记载。本品为百合科植物云南重楼Paris polyphylla Smithvar.yunnanensis(Franch.)Hand.-Mazz.或七叶一枝花Paris polyphylla Smithvar.chinensis(Franch.)Hara的干燥根茎。主要用于治疗疔疮痈肿，咽喉肿痛，蛇虫咬伤，跌扑伤痛，惊风抽搐，具有凉肝定惊，消肿止痛，清热解毒的功效。重楼作为一种重要的中成药原料，云南白药、季德胜蛇药片、宫血宁胶囊等产品的主要原料均来源于重楼，因此，近年来市场需求旺盛，重楼的价格也随之暴涨，供不应求。

重楼属植物的外貌特征一致，即均具有一轮叶、一个茎和顶生一只花，故该属植物分类学地位至今未有定论，不同种间外部形态特征较为相似，不容易区分。近年来，伴随着重楼市场需求的增长，过度采挖及生境的破坏导致重楼属植物野生资源急剧减少，很多地区出现了同属多种植物相混入药的现象，导致商用药材基原混杂，药材品质参差不齐，亟需开发出一种快速鉴定重楼药材的有效方法。

发明内容

本发明的目的在于解决通过形态鉴定的主观性，以有效保障药材基源的准确性和稳定性，确保用药安全。基于此，本发明给出一种利用CDDP标记构建重楼属植物指纹图谱的方法。本发明通过构建重楼属植物的分子指纹图谱，为合理利用重楼属植物种质资源、鉴定商用重楼基源种提供了理论指导，同时对于保障重楼用药安全和药材质量具有重要的参考价值。

为了实现上述目的，本发明采取如下的技术方案：

一种利用CDDP标记构建重楼属植物指纹图谱的方法，其包括重楼属植物基因组DNA的提取与检测；CDDP多态性引物的筛选；利用筛选的CDDP多态性引物对重楼属植物进行PCR扩增与电泳检测；选取核心引物构建重楼属植物的CDDP指纹图谱。

具体地，所述利用CDDP标记构建重楼属植物指纹图谱的方法，其包括步骤：

1)采集重楼属植物，提取重楼属植物基因组DNA，并检测基因组DNA的完整性和浓度；

2)选取两种重楼属植物的基因组DNA进行CDDP多态性引物的筛选；

3)利用筛选的CDDP多态性引物对重楼属植物进行PCR扩增与电泳检测；

4)从CDDP多态性引物中选取核心引物，构建重楼属植物的CDDP指纹图谱。

进一步优选地，所述利用CDDP标记构建重楼属植物指纹图谱的方法，在步骤1)中，选取野外采集的重楼属植物叶片，分别编号，提取叶片的基因组DNA；1％琼脂糖电泳30min检测基因组DNA完整性，紫外分光光度计测定DNA浓度。