[发明专利]流式细胞仪光谱重叠信号数字处理方法

权利要求书

1.一种流式细胞仪光谱重叠信号数字处理方法，所述方法包括以下步骤：

1)利用互相关算法对荧光信号相对于散射光信号的时延进行估计，并对电路系统引入的时延进行校正，得到荧光信号相应的荧光寿命，所述互相关算法的公式为：

其中，fs为散射光信号；fl_a，fl_b为光谱重叠后检测到的荧光信号，K₁，C₁，D₁为实际荧光信号强度；t₀为fs的中心点位置；t₀’为散射光信号未经过电路系统之前的中心点位置；τ₁，τ₂为fl₁，fl₂的荧光寿命；h₀(t),h₁(t),h₂(t)分别为fs，fl₁，fl₂电路系统传递函数；K₀，C₀，D₀为荧光信号强度；Δt_a,Δt_b为fl_a，fl_b相对于fs的时延；t为时间，σ为标准差；

2)利用得到的荧光寿命τ₁，τ₂对检测到的类高斯脉冲信号进行人为调制，利用相移特征对时延量进行表征，所述进行人为调制的方法如下述公式：

其中，K₂，C₂，D₂为调制后的荧光信号强度；为人为引入的相移，用于对时延特性进行表征，ω₀为调制频率；t为时间，σ为标准差，fs_mod为散射光信号fs经过人为调制后的光强信号；fl_a_mod为荧光信号fl_a经过人为调制后的光强信号；fl_b_mod为荧光信号fl_b经过人为调制后的光强信号；

3)引入具有特定相移特性的参考信号，实现原始脉冲信号的频谱迁移，并经过低通滤波实现光谱重叠影响的消除，其中，

引入具有特定相移特性的参考信号通过如下公式来实现：

其中，为参考信号的相位，t为时间，fl_a_mix为信号fl_a_mod经过频谱迁移后的光强信号；fl_b_mix为信号fl_b_mod经过频谱迁移后的光强信号；

经过低通滤波实现光谱重叠影响的消除通过如下公式来实现：

其中，t为时间，σ为标准差，fl₁，fl₂为信号fl_a_mix，fl_b_mix经过低通滤波后的光强信号，即为光谱重叠剔除后原始荧光信号。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述步骤1)中fs、fl_a、fl_b的采样频率为100MHz。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述散射光采用波长488nm的激光激发荧光染料的荧光发射光。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述荧光染料选自FITC、PE。