[发明专利]一种基于脐带间充质干细胞分泌活性因子的驻颜面膜及其制备方法

权利要求书

1.一种基于脐带间充质干细胞分泌活性因子的驻颜面膜制备方法，其特征在于：其制备步骤包括，

1)选取产房中剥离新生胎儿后的脐带组织放入脐带运输液，且经4℃环境下36小时内冷藏后提取脐带间充质干细胞进行培养；

2)选取截留量为3500D的透析袋在透析袋置内对培养的脐带间充质干细胞进行透析处理，后利用透析脱水剂进行脱水处理；

3)经过透析处理的脐带间充质干细胞预冻后通过冻干机制备成冻干粉；

4)用透明质酸和面膜液溶解冻干粉形成驻颜面膜。

2.根据权利要求1所述的一种基于脐带间充质干细胞分泌活性因子的驻颜面膜制备方法，其特征在于：所述步骤1)中的干细胞培养步骤为：

(1)实验操作人员取出脐带组织放入预冷的组织清洗液中清洗两次，并取少许运输液做无菌检测；

(2)清洗后的脐带组织剪成4-5cm的小段，清洗一次；在清洗液中剥离脐带组织中的血管和表皮；华通氏胶撕成小块，清洗后于50ml离心管中剪碎；

(3)组织碎块转移至125ml储液瓶中，加入1-2倍体积的组织消化液，于37℃振荡培养箱中消化1.5-2小时，直至无成形组织块；

(4)消化结束后加入20-30ml 0.05％的胰酶继续消化10分钟，即完成组织消化；消化后细胞悬液中加入50-60mlDMEM培养基，混匀后静置2分钟以便于未消化的组织块沉降；

(5)细胞悬液过100um筛网去除未消化的组织块；细胞悬液离心(2000r*10min)后去除上清液；加入30mlDMEM培养基清洗一次，离心(2000r*5min)后去上清；

(6)沉淀可以直接接种或冻存，接种密度由组织量决定，约10ml组织接种一个15cmBD培养皿，约5-6ml组织接种一个T75培养瓶；

(7)接种的细胞放入培养箱中静置培养三天，三天后全量换液去除杂物，之后每3天半量或全量换液，细胞长至80％-90％时传代；

(8)按照1:4传代，细胞生长三天长到90％左右，传第二代，以此类推，传到第三代，收集培养基上清备用。

3.根据权利要求1所述的一种基于脐带间充质干细胞分泌活性因子的驻颜面膜制备方法，其特征在于：所述步骤2)中的透析袋长度为10-20cm，新透析袋用沸水煮五至十分钟，再用蒸馏水洗净，即可使用，使用后的透析袋洗净后需存于4℃蒸馏水中，若长时间不用则需加入少量NaN2，洗净凉干的透析袋弯折时易裂口，不漏时方可重复使用。

4.根据权利要求1所述的一种基于脐带间充质干细胞分泌活性因子的驻颜面膜制备方法，其特征在于：所述步骤2)中的透析袋置在1mmol/LEDTA(PH＝8)中煮沸10min，且透析脱水剂选用PEG6000。

5.根据权利要求1和2所述的一种基于脐带间充质干细胞分泌活性因子的驻颜面膜制备方法，其特征在于：所述干细胞培养的清洗液选用0.9％的生理盐水，所述培养基含有酚红。

6.根据权利要求1所述的一种基于脐带间充质干细胞分泌活性因子的驻颜面膜制备方法，其特征在于：所述步骤3)中的面膜液主要成分是甘油和无菌水，按照1:9比例混合，总体积10ml，且所用的透明质酸每瓶2ml。

7.如权利要求1至所述的一种基于脐带间充质干细胞分泌活性因子的驻颜面膜制备方法制备的驻颜面膜。