[发明专利]一种基于非线性杂交链式扩增的适配体-DNA高分子聚合物的构建方法和应用

权利要求书

1.一种基于非线性杂交链式扩增的适配体-DNA高分子聚合物的构建方法，其特征在于，包括四条基底链S1、S2、S3、S4，两条辅助链H1、H2，一条引发链和一条适配体链，碱基序列如下：

基底链S1：

GTGTGCCTATTATGTCtcctcctGTGTGCCTATTATGTCtcctcctCAGCTTCATCAACTAGTTcgtca

基底链S2：

AACTAGTTGATGAAGCTGGACATAATAGGCACACGACATAATAGGCACAC基底链S3：aggagGAGACATAATAGGCACACtgacgaaCTAGTTGATGAAGCTG

基底链S4：CAGCTTCATCAACTAGGTGTGCCTATTATGTCTC

辅助链H1：GTGCCTATTATGTCGTGTGCCTATTATGTCCAGCTT

辅助链H2：GCACACCTAGTTGATGAAGC

引发链：tgacgAACTAGTTGATGAAGCTG

适配体链：

ATCTAACTGCTGCGCCGCCGGGAAAATACTGTACGGTTAGAaaaaaCAGCTTCATCAACTAGTTCGTCA；

具体包括以下步骤：

将基底链S1与S3分别溶解后，用lμL磷酸化酶处理，在PCR仪中37℃反应1-3h后，80- 95℃处理10min，结束磷酸化过程，得到基底链S1*和S3*；

基底链S1*与S2、基底链S3*与S4分别按比例混合，在PCR仪中80-90℃退火处理 10min，并进行程序降温，使其以0.1℃/s冷却至25℃，得到主链S1*S2和主链S3*S4，放置4℃备用；

主链S1*S2和主链S3*S4溶液中分别加入辅助链H1和H2，在PCR仪中37℃孵育30min；

将步骤（3）得到两个溶液混合均匀，加入引发链，充分混匀后在37℃孵育60min，使其自主进行非线性杂交链式反应；

向步骤（4）得到的溶液中加入适配体链，充分混匀后在37℃孵育60min，得到末端有适配体连接的DNA高分子聚合物；

将步骤（5）中得到的溶液中加入连接酶，在PCR仪中进行连接反应，16℃反应2-4h，最终得到缺口闭合、在血清和高温中稳定存在的适配体-DNA高分子聚合物；

步骤（2）所述基底链S1*与S2、基底链S3*与S4分别按照2:3~1:2的摩尔比混合；步骤（3）所述辅助链H1与辅助链H2的摩尔比为1:1~1:2，且辅助链H1与步骤（2）中所述主链S1*S2的摩尔比为1:3~2:3；步骤（4）所述引发链的添加量是主链S1*S2摩尔量的10%；步骤（5）所述加入适配体链的终浓度为70nM~100nM。

2.如权利要求1所述制备的适配体-DNA高分子聚合物在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，具体方法为：称取抗肿瘤药物加入适配体-DNA高分子聚合物中溶解后，37℃避光反应24h，得到载药的适配体-DNA高分子聚合物；所述的抗肿瘤药物为含有氨基的蒽环类抗生素；所述的蒽环类抗生素为阿霉素；适配体-DNA高分子聚合物与阿霉素的摩尔比为1:312。