[发明专利]一种绒毛膜间充质干细胞冻存液

权利要求书

1.一种绒毛膜间充质干细胞冻存液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)采集胎盘样本，在24小时内对胎盘样本进行处理，将胎盘样本上绒毛膜组织剪切并进行消化，消化液为0.25％胰酶-EDTA，消化液与绒毛膜体积比为1:4-1:1，消化时间30-60分钟，消化后用100微米滤网进行过滤，将消化、过滤后的细胞接种至T75培养瓶中培养；

(2)每隔3-4天，对T75培养瓶中的细胞用无血清完全培养基进行换液，待细胞融合率至75-90％时进行传代，弃去培养液上清，用生理盐水清洗细胞2遍，再向细胞中加入3ml的0.25％胰酶-EDTA，消化3分钟，用5倍消化液体积的完全培养基终止消化，1500rpm条件下离心5分钟，收集细胞接种于含完全培养基的培养瓶中，接种密度为3000-8000/cm²；

(3)传代至P2-P5代后，细胞连续培养24-96小时后，收集培养上清液，将上清液转移入无菌离心管中，在1000-1500rpm条件下，离心5-10分钟，去除沉淀，或者将上清液通过70微米滤网过滤，获得滤液，获得绒毛膜间充质干细胞条件培养基；

(4)将二甲基亚砜，人血白蛋白，所述绒毛膜间充质干细胞条件培养基分别按照体积百分比10％-20％、20％-70％、10％-60％混匀，获得绒毛膜间充质干细胞冻存液。

2.根据权利要求1所述的一种绒毛膜间充质干细胞冻存液的制备方法，其特征在于：步骤(4)中所述二甲基亚砜、人血白蛋白、绒毛膜间充质干细胞条件培养基分别按照体积百分比10％、40％、50％混匀制成绒毛膜间充质干细胞冻存液。

3.根据权利要求1所述的一种绒毛膜间充质干细胞冻存液的制备方法，其特征在于：所述绒毛膜间充质干细胞是人绒毛膜间充质干细胞。

4.一种绒毛膜间充质干细胞冻存液，其特征在于：根据权利要求1所述的方法制备的绒毛膜间充质干细胞冻存液。