[发明专利]自断蛋白的活性控制及其应用

权利要求书

1.一种自断蛋白，包括一内含蛋白，其特征是，所述内含蛋白的N端第1个氨基酸有一突变，其中所述内含蛋白源自于NpuDnaE。

2.如权利要求1所述的自断蛋白，其特征是，所述突变包括置换、删除、插入及/或取代。

3.如权利要求1所述的自断蛋白，其特征是，所述内含蛋白N端第1个氨基酸半胱氨酸(Cys)经由所述突变而改变N端序列，造成所述内含蛋白失去N-端自我断裂活性。

4.如权利要求1所述的自断蛋白，其特征是，所述自断蛋白的序列系包括:SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2。

5.一种融合蛋白，具有下式(I)结构：

(X)n-(I)-(P)m (I)

其中，

X为氨基酸序列、连接符、磁珠或其类似物；

I为权利要求1所述的自断蛋白；

P为目标蛋白；

n为0以上的整数；以及

m为1以上的整数。

6.如权利要求5所述的融合蛋白，其特征是，所述X为一标签序列，所述标签序列包括任何供协助纯化及表达的氨基酸序列。

7.如权利要求6所述的融合蛋白，其特征是，所述标签序列包括但不限于His-Tag或GST-Tag。

8.如权利要求5所述的融合蛋白，其特征是，所述目标蛋白为多肽、蛋白质、重组蛋白、抗体、酵素或激素。

9.一种蛋白质表达载体，其特征是，所述蛋白质表达载体包含如权利要求1所述的自断蛋白的核苷酸序列。

10.如权利要求9所述的蛋白质表达载体，其特征是，所述核苷酸序列包括:SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4。

11.如权利要求9所述的蛋白质表达载体，其特征是，所述包括但不限于His-Tag或GST-Tag的核苷酸序列。

12.一种生产、纯化蛋白质的方法，包括:

(a)在宿主中表达如权利要求5所述的融合蛋白；

(b)在抑制条件下收集、纯化所述融合蛋白，其中所述抑制条件为pH值中性至酸性条件；

(c)将所述融合蛋白置于促进条件，使所述融合蛋白中的自断蛋白断裂，且目标蛋白与所述自断蛋白分离，所述促进条件为pH碱性条件；以及

(d)收集、纯化该目标蛋白。

13.如权利要求12所述的方法，其特征是，所述pH值中性至酸性条件为pH值4-7。

14.如权利要求12所述的方法，其特征是，所述抑制条件为高盐度环境。

15.如权利要求14所述的方法，其特征是，所述高盐度环境为盐浓度300mM以上。

16.如权利要求12所述的方法，其特征是，所述抑制条件为温度为25℃以下的环境。

17.如权利要求12所述的方法，其特征是，所述pH碱性条件为pH值7-11。

18.如权利要求12所述的方法，其特征是，所述促进条件为低盐度环境。

19.如权利要求18所述的方法，其特征是，所述低盐度环境为盐浓度300mM以下。

20.如权利要求12所述的方法，其特征是，所述促进条件为温度为25℃以上的环境。