[发明专利]一种干扰二化螟几丁质酶基因CsCht10的siRNA

说明书

本发明公开了一种干扰二化螟几丁质酶基因CsCht10的siRNA，通过RNA干扰技术，使注射特定siRNA干扰二化螟的几丁质酶基因CsCht10后，再结合喷洒白僵菌对二化螟幼虫进行毒杀，白僵菌防治效果得到显著提升。

技术领域

本发明属于农业生物技术领域，具体的涉及一种干扰二化螟几丁质酶基因CsCht10的 siRNA及其应用。

背景技术

二化螟Chilo suppressalis(Walker)属鳞翅目，螟蛾科，是我国水稻上危害最为严重的常发性害虫之一。在我国，化学药剂连续单一长期使用已导致二化螟对多种农药产生了不同程度的抗性，需要不断加大农药使用量才能达到满意的防治效果，造成了更为严重的环境污染，形成恶性循环。因此，在农业生产实践中，以白僵菌、绿僵菌、苏云金杆菌等真菌作为生物农药被广泛运用于害虫防治。白僵菌(Beauveria)是一种真菌性杀虫剂，对人、畜无毒，对作物安全，无残留、无污染，但对家蚕有毒害，在自然界中广泛分布。已知白僵菌可侵染200 多种昆虫，是很好的防治害虫的生物制剂，而球孢白僵菌(Beauveriabassiana)是目前研究和应用最多的病原真菌之一，能够引起二化螟、蓟马、烟粉虱、松毛虫等昆虫白僵病的发生，现已广泛应用于工农业生产上。

几丁质是昆虫的表皮和围食膜等结构的重要组分，在昆虫生长发育的各个时期都需要一定量的几丁质酶来调节几丁质含量，以适应周期性的蜕皮和变态。几丁质酶可以用于降解昆虫表皮和围食膜等结构中的几丁质，破坏昆虫的保护屏障，从而为其它昆虫病原微生物侵入其体内提供便利，有助于提高昆虫的感病率以及死亡率。几丁质酶与昆虫幼虫的蜕皮、化蛹以及成虫的羽化密切相关。农业生产上，几丁质酶及其抑制剂可以用作生物杀虫剂或杀菌剂，有助于提高作物的抗虫、抗病等能力。

作为现代分子生物学领域重大的技术突破之一，RNA干扰(RNAi)是目前研究基因功能比较成熟有效的分子生物学技术。实验证明，利用RNAi技术来沉默某些昆虫基因的表达，可以达到影响昆虫发育甚至致死的目的。随着昆虫基因的功能分析显著增加，特别是那些沉默导致死亡或干扰病原体传播的基因，鉴定这些候选基因对于增加RNAi在病虫害防治中的作用意义重大，而RNAi技术则可作为控制病虫害(包括作为植物病原体重要载体的病虫害) 的有效策略。

昆虫几丁质酶基因对昆虫生命活动的维持有重要的作用，因此，从理论上而言，如果利用RNAi技术干扰农业害虫中重要几丁质酶基因的表达并结合真菌的侵染，则会使害虫的致畸率或致死率增强，达到联合毒杀的效果。本专利发明就是提供了一种通过注射特定siRNA 来干扰二化螟几丁质酶基因CsCht10，并结合生物农药白僵菌联合侵染致死二化螟幼虫，白僵菌对二化螟的防治效果得到提升。

发明内容

本发明的目的提供了用于二化螟防治中增强白僵菌防治效果的RNAi技术的靶标基因及其应用，可通过如下技术方案实现：

一种干扰二化螟几丁质酶基因CsCht10的siRNA，其特征在于，所述siRNA序列如SEQ ID No.1所示：

本发明的siRNA在制备二化螟灭虫药剂中的应用；

一种二化螟灭虫方法，其特征在于：将权利要求1所述的siRNA用溶剂溶解配置成溶液 A，使用溶液A注射二化螟幼虫：

优选地，

(1)所述溶剂为经焦碳酸二乙酯(DEPC)处理过的无菌水，所述溶液A的浓度为100pmol/μl；

(2)在二化螟幼虫的上背部或侧面，对二化螟幼虫注射溶液A 2μL/头；

(3)用针头挑起虫体，待溶液A已混入幼虫血腔，轻轻拔出针头；

(4)注射24小时后，用白僵菌孢子悬浮液喷洒注射过溶液A的二化螟幼虫。

有益效果：